在日常培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)RAW264.7細(xì)胞容易出現(xiàn)的問題主要為以下幾種：

1.復(fù)蘇不易成功2.細(xì)胞形態(tài)變異明顯3.消化困難4.細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，當(dāng)你的細(xì)胞培養(yǎng)遇到上述瓶頸，不妨試一試以下幾種解決辦法。

1、復(fù)蘇難以成功

原因：RAW264.7對(duì)空間十分敏感，復(fù)蘇密度太高，細(xì)胞增殖太快，加劇細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)缺失，加速細(xì)胞老化。

解決辦法：T75培養(yǎng)瓶復(fù)蘇細(xì)胞數(shù)量控制在104~105

2、細(xì)胞變異明顯

原因：細(xì)胞吞噬抗原過多、培養(yǎng)環(huán)境惡劣都會(huì)促使該細(xì)胞呈現(xiàn)梭形、長(zhǎng)梭形

解決辦法：改善細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境，例如與細(xì)胞接觸的玻璃器皿均高溫滅菌，換flask培養(yǎng)瓶，采用一次性器具，使用質(zhì)量較高的胎牛血清

3、消化困難

原因：細(xì)胞老化后，細(xì)胞偽足多且長(zhǎng)，使細(xì)胞難消化，使用胰酶或細(xì)胞刮會(huì)對(duì)細(xì)胞損傷較大

解決辦法：無需胰酶使用吸管重復(fù)吹打，可消化大部分正常狀態(tài)的細(xì)胞；但若細(xì)胞為“長(zhǎng)腳"狀態(tài)，即使加入胰酶消化超過10min，也難以消化下來，勉強(qiáng)消化，對(duì)后續(xù)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)也有較大影響。

4、生長(zhǎng)緩慢

原因：支原體污染會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，甚至難以貼壁

解決辦法：定期進(jìn)行支原體檢測(cè)，如發(fā)現(xiàn)支原體污染，即刻使用支原體去除試劑