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GB31658.17-2021多獸殘?zhí)幚矸桨缚晒﹨⒖?/h1>
2022年最新版食品安全抽檢實(shí)施細(xì)則更新了針對(duì)于牛、羊、豬、雞的肌肉、及肝、腎組織中部分四環(huán)素類(lèi)、磺胺類(lèi)和喹諾酮類(lèi)的檢測(cè)方法——《GB31658.17-2021動(dòng)物性食品中四環(huán)素類(lèi)、磺胺類(lèi)和喹諾酮類(lèi)藥物殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，中檢維康參照該標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行試驗(yàn)，并優(yōu)化了部分參數(shù)，建立了一份具有良好回收率及穩(wěn)定性，能滿足國(guó)標(biāo)要求的 SPE-HPLC-MS/MS 方法，可供參考。
1.樣品提取
準(zhǔn)確稱(chēng)取粉碎均勻的肉類(lèi)樣品1g(精確至 0.01 g)于干凈離心管中，加入8 mL Mcllvaine-Na2EDTA 溶液，渦旋混勻后超聲提取 20 min，-5℃下 120000 r/min 離心 5 min，取出上清液于另一干凈離心管，試樣殘
渣加入 8 mL 磷酸鹽緩沖液，同上述操作，合并兩次提取液，-5℃下 120000 r/min 離心 5 min，上清液待凈化。
Mcllvaine-Na2EDTA 緩沖液：取檸檬酸·一水 12.9g、磷酸氫二鈉·十二水 10.9g、乙二胺四乙酸二鈉·二水 39.2g,加水 900mL,用 1mol/L 的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH 至 5.0±0.2，用水稀釋至 1000mL。
磷酸鹽緩沖液：取 0.05 mol/L 磷酸二氫鈉溶液 190 mL,用 0.05 mol/L 磷酸氫二鈉溶液稀釋至 1000mL。
2.樣品凈化
活化：固相萃取柱依次用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。（Clover HLB,200mg/6mL）
上樣：取上述待凈化液加入活化好的固相萃取柱中。
淋洗：依次用 5 mL 水，5 mL 5%甲醇-水溶液，抽干。
洗脫：用 8 mL 甲醇：乙酸乙酯：氨水=50:50:2 溶液進(jìn)行洗脫。
收集全部洗脫液，45℃下氮吹至 100 μL 左右，加入 0.1%甲酸溶液定容至1mL,過(guò) PTFE 親水濾膜，上機(jī)測(cè)試。
3.基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備
取 6 個(gè)空白基質(zhì)樣品同正常樣品一樣操作，收集洗脫液后，于洗脫液中分別加入適量標(biāo)液，再與其他樣品洗脫液一同氮吹，定容，使最終上機(jī)溶液的濃度分別為 2 μg/L、10 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、500 μg/L。
4.儀器條件
(1)色譜條件
儀器：UPLC-MS/MS(Thermo Fisher TSQ Endura)
色譜柱：Hypersil GOLD C18 (2.1 mm×100 mm，1.9 μm)
流動(dòng)相：A：水(0.1 %甲酸) B：甲醇：乙腈=2:8(0.1 %甲酸)
洗脫方式：梯度洗脫，見(jiàn)表 1
流速：0.3 mL/min
柱溫：35℃
進(jìn)樣量：10 μL
(2)質(zhì)譜條件
子源：HESI
電噴霧電壓：3500 V
鞘氣壓力：40 arb
輔氣壓力：2 arb
離子傳輸管：380 ℃
輔氣溫度：350 ℃
5.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
圖1 添加水平為100.0 μg/kg 時(shí)豬肉中獸殘的總離子流圖
圖2 添加水平為100.0 μg/kg 時(shí)雞肉中獸殘的總離子流圖
優(yōu)化 Tips：
1.在提取過(guò)程中降低離心的溫度至-5℃可以更好的抑制樣品中的脂肪在水溶液表面的分散，有利于樣品的提取轉(zhuǎn)移。
2.在超聲提取完合并兩次的提取液之后，再進(jìn)行一次離心，更好的去除基質(zhì)的影響，便于上樣過(guò)柱。
3.在淋洗過(guò)程中使用 5 mL 5%甲醇-水溶液淋洗液，可以減少在淋洗過(guò)程中部分目標(biāo)物的損失。
4.標(biāo)準(zhǔn)中氮吹至 100 μL 左右，不氮吹干可以減少在氮吹過(guò)程中部分目標(biāo)化合物的損失。
5.復(fù)溶時(shí)，加入 0.1%甲酸溶液定容至 1 mL,可以有效的改善部分目標(biāo)化合物的峰型，同時(shí)提高部分化合物的回收率。6.為了改善上樣后的流速問(wèn)題，使用 Clover ® HLB( 貨號(hào)：HLB2006-M)較普通的 HLB 凈化柱可以獲得更好的流速。
6.訂購(gòu)信息
2022年最新版食品安全抽檢實(shí)施細(xì)則更新了針對(duì)于牛、羊、豬、雞的肌肉、及肝、腎組織中部分四環(huán)素類(lèi)、磺胺類(lèi)和喹諾酮類(lèi)的檢測(cè)方法——《GB31658.17-2021動(dòng)物性食品中四環(huán)素類(lèi)、磺胺類(lèi)和喹諾酮類(lèi)藥物殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，中檢維康參照該標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行試驗(yàn)，并優(yōu)化了部分參數(shù)，建立了一份具有良好回收率及穩(wěn)定性，能滿足國(guó)標(biāo)要求的 SPE-HPLC-MS/MS 方法，可供參考。
1.樣品提取
準(zhǔn)確稱(chēng)取粉碎均勻的肉類(lèi)樣品1g(精確至 0.01 g)于干凈離心管中，加入8 mL Mcllvaine-Na2EDTA 溶液，渦旋混勻后超聲提取 20 min，-5℃下 120000 r/min 離心 5 min，取出上清液于另一干凈離心管，試樣殘
渣加入 8 mL 磷酸鹽緩沖液，同上述操作，合并兩次提取液，-5℃下 120000 r/min 離心 5 min，上清液待凈化。
Mcllvaine-Na2EDTA 緩沖液：取檸檬酸·一水 12.9g、磷酸氫二鈉·十二水 10.9g、乙二胺四乙酸二鈉·二水 39.2g,加水 900mL,用 1mol/L 的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH 至 5.0±0.2，用水稀釋至 1000mL。
磷酸鹽緩沖液：取 0.05 mol/L 磷酸二氫鈉溶液 190 mL,用 0.05 mol/L 磷酸氫二鈉溶液稀釋至 1000mL。
2.樣品凈化
活化：固相萃取柱依次用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。（Clover HLB,200mg/6mL）
上樣：取上述待凈化液加入活化好的固相萃取柱中。
淋洗：依次用 5 mL 水，5 mL 5%甲醇-水溶液，抽干。
洗脫：用 8 mL 甲醇：乙酸乙酯：氨水=50:50:2 溶液進(jìn)行洗脫。
收集全部洗脫液，45℃下氮吹至 100 μL 左右，加入 0.1%甲酸溶液定容至1mL,過(guò) PTFE 親水濾膜，上機(jī)測(cè)試。
3.基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的制備
取 6 個(gè)空白基質(zhì)樣品同正常樣品一樣操作，收集洗脫液后，于洗脫液中分別加入適量標(biāo)液，再與其他樣品洗脫液一同氮吹，定容，使最終上機(jī)溶液的濃度分別為 2 μg/L、10 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、500 μg/L。
4.儀器條件
(1)色譜條件
儀器：UPLC-MS/MS(Thermo Fisher TSQ Endura)
色譜柱：Hypersil GOLD C18 (2.1 mm×100 mm，1.9 μm)
流動(dòng)相：A：水(0.1 %甲酸) B：甲醇：乙腈=2:8(0.1 %甲酸)
洗脫方式：梯度洗脫，見(jiàn)表 1
流速：0.3 mL/min
柱溫：35℃
進(jìn)樣量：10 μL
(2)質(zhì)譜條件
子源：HESI
電噴霧電壓：3500 V
鞘氣壓力：40 arb
輔氣壓力：2 arb
離子傳輸管：380 ℃
輔氣溫度：350 ℃
5.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
圖1 添加水平為100.0 μg/kg 時(shí)豬肉中獸殘的總離子流圖
圖2 添加水平為100.0 μg/kg 時(shí)雞肉中獸殘的總離子流圖
優(yōu)化 Tips：
1.在提取過(guò)程中降低離心的溫度至-5℃可以更好的抑制樣品中的脂肪在水溶液表面的分散，有利于樣品的提取轉(zhuǎn)移。
2.在超聲提取完合并兩次的提取液之后，再進(jìn)行一次離心，更好的去除基質(zhì)的影響，便于上樣過(guò)柱。
3.在淋洗過(guò)程中使用 5 mL 5%甲醇-水溶液淋洗液，可以減少在淋洗過(guò)程中部分目標(biāo)物的損失。
4.標(biāo)準(zhǔn)中氮吹至 100 μL 左右，不氮吹干可以減少在氮吹過(guò)程中部分目標(biāo)化合物的損失。
5.復(fù)溶時(shí)，加入 0.1%甲酸溶液定容至 1 mL,可以有效的改善部分目標(biāo)化合物的峰型，同時(shí)提高部分化合物的回收率。6.為了改善上樣后的流速問(wèn)題，使用 Clover ® HLB( 貨號(hào)：HLB2006-M)較普通的 HLB 凈化柱可以獲得更好的流速。
6.訂購(gòu)信息