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技術文章

快速細菌鑒定16S rDNA 試劑盒介紹及參數(shù)分析2023已更新

閱讀:629          發(fā)布時間:2023-11-17

Nu-16S01

試劑盒應用

本試劑盒主要用于細菌16S rDNA 的快速檢測,無需經過繁瑣的基因組DNA 提取純化,取樣后直接PCR 擴增即可獲得16S rDNA 信息,通過比對16S 片段序列,終獲得細菌種屬信息。本試劑盒可以檢測量低至104 個/mL 個細菌,對難培養(yǎng)、珍貴樣本、表型不能鑒定的未知細菌快速擴

增尤為方便。使用本試劑盒無需提取純化,可直接對菌斑、甘油菌或對數(shù)菌進行檢測,從而大大縮短了檢測時間。試劑盒中提供的16S PCR Premix 已包含有染料,PCR 結束后直接進行瓊脂糖凝膠電泳,PCR 產物可直接進行測序分析。

本產品僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等域。

保存條件

-20oC 保存。使用時請置于冰上。

使用方法

1、樣本準備:

1)菌液:取對數(shù)菌液1-3 μL 加入PCR 反應體系中。

2)甘油菌:取1μL 菌液加入PCR 反應體系中。

3)單菌落:無菌吸頭或者無菌牙簽挑取單個菌落置于500 μL 無菌生理鹽水中,渦旋混合均勻,取

1-3 μL 加入PCR 反應體系中。

2、推薦PCR 反應體系

3、按照以下方法設定PCR 反應

4、瓊脂糖凝膠電泳

使用1%瓊脂糖凝膠進行電泳,不同菌株電泳片段稍微差別,一般為1.5kb 左右。

5、PCR 產物回收和測序

使用切膠回收試劑盒進行回收,并使用以下推薦引物進行測序。將DNA 測序結果與NCBI 數(shù)據

庫進行比對,確定細菌種類。

注意事項

1、超凈臺中操作,應佩戴無菌手套,穿實驗服,操作用75%乙醇對實驗器具進行消毒。

2、使用無菌移液吸頭和離心管,開蓋務必輕柔,減少氣溶膠污染。

3、盡可能使用2 次純化細菌,以提高測序效率。


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