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技術(shù)文章

ColProof細(xì)胞和組織DNA快速提取試劑盒產(chǎn)品應(yīng)用介紹

閱讀:837          發(fā)布時(shí)間:2023-3-22

試劑盒應(yīng)用


本試劑盒針對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞、組織開(kāi)發(fā)的專用裂解液DC,在10 分鐘內(nèi)完成細(xì)胞和組織的裂解、提

取和純化。使用高效硅基DNA 純化柱,高效結(jié)合基因組DNA,從而獲得純度高,產(chǎn)量高的基因組

DNA。提取的基因組DNA 完整性高,適合PCR、qPCR、酶切、Southern 雜交、文庫(kù)構(gòu)建、克隆等。

本試劑盒僅供研究使用,不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。

試劑盒組成

保存條件

室溫保存一年。

自備材料

無(wú)水乙醇、無(wú)DNase 和無(wú)RNase 離心管、RNaseA(10mg/mL,或貨號(hào)QR0101)

使用方法

1. 樣本處理

1.1 從動(dòng)物組織中提取DNA

1.1.1 取20-100mg 樣本放入液氮中充分研磨,加入700μL 裂解液DC,充分混勻,室溫作用1 分鐘。

或取20-100mg 樣本加入700μL 裂解液DC,加入1 顆鋼珠,放入組織研磨器中,研磨1-2 分鐘。

1.1.2 (選做)加入5μL RNase A(10mg/mL),室溫靜置5-10 分鐘。

1.1.3 加入350μL 無(wú)水乙醇,充分混勻,12,000rpm 離心1 分鐘。

1.1.4 取700μL 上清加到DNA 純化柱中,按照步驟2.1-2.7 操作。

1.2 從懸浮細(xì)胞中提取DNA

1.2.1 細(xì)胞1,000rpm 離心5 分鐘,收集細(xì)胞沉淀。

1.2.2 細(xì)胞數(shù)量<5×106 個(gè)時(shí),加入500μL 裂解液DC。細(xì)胞數(shù)量為5×106~1×107 個(gè)時(shí),加入700μL 裂

解液DC。輕輕吹打混勻,室溫放置1 分鐘。

1.2.3 (選做)加入5μL RNase A(10mg/mL),室溫靜置5-10 分鐘。

1.2.4 加入0.5 倍體積的無(wú)水乙醇,上下顛倒混勻。

1.2.5 取700μL 加入DNA 吸附柱中,按照步驟2.1-2.7 操作。

1.3 從貼壁細(xì)胞中提取DNA

1.3.1 胰酶消化細(xì)胞后1,000rpm 離心5 分鐘,收集細(xì)胞沉淀。

1.3.2 細(xì)胞數(shù)量<5×106 個(gè)時(shí),加入500μL 裂解液DC。細(xì)胞數(shù)量為5×106~1×107 個(gè)時(shí),加入700μL 裂

解液C。輕輕吹打混勻,室溫放置1 分鐘。

1.3.3 (選做)加入5μL RNase A(10mg/mL),室溫靜置5-10 分鐘。

1.3.4 加入0.5 倍體積的無(wú)水乙醇,上下顛倒混勻。

1.3.5 取700μL 加入DNA 吸附柱中,按照步驟2.1-2.7 操作。

2. DNA 純化

2.1 12,000rpm 離心30 秒,倒掉收集管中廢液。

2.2 向吸附柱中加入500μL 洗滌液DCW1,12,000rpm 離心1 分鐘,倒掉收集管中廢液。

2.3 向吸附柱中加入500μL 洗滌液DCW2,12,000rpm 離心30 秒,倒掉收集管中廢液。

2.4 重復(fù)步驟2.3 一次。

2.5 12,000rpm 離心2 分鐘,倒掉收集管中廢液。

2.6 將吸附柱放入新無(wú)DNase 和無(wú)RNase 離心管,加入30-50μL 洗脫液C,室溫放置1 分鐘。

2.7 12,000rpm 離心2 分鐘,得到DNA 溶液,-80℃保存。

注意事項(xiàng)

1. 經(jīng)常更換手套,防止DNA 污染。

2. 使用無(wú)DNase 無(wú)RNase 的吸頭和離心管,防止DNA 降解。

3. 常更換吸頭,防止交叉污染。

4. 動(dòng)作輕柔,防止基因組DNA 斷裂。

5. 為了提高洗脫效率,可提前將洗脫液C 置于65℃水浴后再使用。



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