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技術(shù)文章

RAW264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑-AD600025試劑

閱讀:969          發(fā)布時(shí)間:2022-1-20

簡(jiǎn)要描述:

RAW264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞、活體動(dòng)物轉(zhuǎn)染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑,此技術(shù)成為新的蛋白功能、免疫細(xì)胞及干細(xì)胞治療、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關(guān)鍵技術(shù)之一。

一、產(chǎn)品說明:

1、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2、包裝規(guī)格

貨號(hào):AD600025 、AD600050、AD600075、AD600150

規(guī)格:0.25ml、0.5ml、0.75ml、1.5ml

3、儲(chǔ)存條件

常溫運(yùn)輸,4℃保存,可保存兩年,拒絕反復(fù)凍融。

二、RAW264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染質(zhì)粒8100bp效果圖和轉(zhuǎn)染條件

轉(zhuǎn)染條件

質(zhì)粒DNA大?。?100bp

培養(yǎng)板:6孔板

轉(zhuǎn)染試劑用量:6ul

質(zhì)粒DNA用量:電訊

轉(zhuǎn)染試劑:Zeta Life Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染時(shí)間:48小時(shí)

血清:Z7010FBS-500澳洲胎牛血清

細(xì)胞凍存:CE70100T無血清細(xì)胞凍存液

三、RAW264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑操作步驟:

材料準(zhǔn)備

RNA 濃度 20 uM /L

質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul(注意:①溶解于無菌雙蒸水或超純水;②無內(nèi)毒素 )

提前 1 天接種細(xì)胞:細(xì)胞匯合度在 60-80%左右,再進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

核酸復(fù)合物制備:將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混勻,室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物:根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物,并輕輕混勻;細(xì)胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

細(xì)胞換液:轉(zhuǎn)染 24 小時(shí)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行正常換液,懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。

分析結(jié)果:質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時(shí)后熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,48-96 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。若 進(jìn)行穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時(shí)熒光檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,48-72 小時(shí)檢測(cè) mRNA 或蛋白表達(dá)。

 

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