流式細(xì)胞技術(shù)科研實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)介紹

時間：2024/9/26閱讀：1701

流式細(xì)胞技術(shù)

應(yīng)用簡介
流式細(xì)胞技術(shù)（flowcytometry,FCM）是利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行的一種單細(xì)胞定量分析和分選技術(shù)。流式細(xì)胞術(shù)是單克隆抗體及免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、激光和電子計算機(jī)科學(xué)等高度發(fā)展及綜合利用的高技術(shù)產(chǎn)物。
技術(shù)原理
流式細(xì)胞儀使懸浮在液體中分散的經(jīng)熒光標(biāo)記的細(xì)胞或微粒逐個通過樣品池，同時由熒光探測器捕獲熒光信號并轉(zhuǎn)換成分別代表前向散射角、側(cè)向散射角和不同熒光強(qiáng)度的電脈沖信號，經(jīng)計算機(jī)處理形成相應(yīng)的點(diǎn)圖，直方圖和加三維結(jié)構(gòu)圖像進(jìn)行分析。用于FCM的樣本是單細(xì)胞懸液，可以是血液、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)液、各種體液、新鮮實(shí)體瘤的單細(xì)胞懸液以及石蠟包埋組織的單細(xì)胞懸液等。
服務(wù)內(nèi)容
1、細(xì)胞表面分子的檢測與分析；
2、細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞核內(nèi)抗原檢測與分析,如胞內(nèi)細(xì)胞因子、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg，CD4+CD25+Foxp3+）；
3、細(xì)胞凋亡的檢測與分析——如PI單染法、Annexin-V-PI復(fù)染法、末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)（TUNEL）、細(xì)胞周期特異性細(xì)胞凋亡的檢測（PI-Annexin-V，PA法）；
4、DNA含量檢測與細(xì)胞周期的分析——如藥物對細(xì)胞周期的影響、流式細(xì)胞核型分析；
5、細(xì)胞增殖的檢測與分析；

流式細(xì)胞分選儀基本原理

技術(shù)特點(diǎn)
1、少量細(xì)胞分選時，流式細(xì)胞分選精確度高（99%以上），速度快。目前，先進(jìn)的流式細(xì)胞儀的分選速度可達(dá)25000個細(xì)胞/秒以上，比傳統(tǒng)的分選速度提高了很多倍，原來需要一天的工作現(xiàn)在只需要幾小時就能完成。不過流式細(xì)胞儀分離細(xì)胞的量還是有一定的限制，一次分離的最大合理量約為108個細(xì)胞。如果細(xì)胞量超過109個，則需要耗費(fèi)10小時以上，分選后細(xì)胞的活力會受到很大的影響。
2、可以同時進(jìn)行多個Marker分選，正選負(fù)選同時進(jìn)行。以前的流式細(xì)胞儀只能給液滴充上正電荷或負(fù)電荷，因此在電場中只能向左或向右偏轉(zhuǎn)，即兩路分選?，F(xiàn)在的儀器可以給液滴充以不同的電量，從而調(diào)整液滴的偏轉(zhuǎn)角度，實(shí)現(xiàn)多路分選。BD的FACSAria流式細(xì)胞儀就可以進(jìn)行四路分選。
3、不僅僅限于表面抗原，流式細(xì)胞儀可以根據(jù)任何能檢測到的發(fā)光度（如細(xì)胞體積）或熒光（如DNA、RNA或蛋白含量，酶活性，特異抗原）散射度差異來分離細(xì)胞。如果能保證流式細(xì)胞儀的無菌狀態(tài)，那么分選后的細(xì)胞還可以進(jìn)行培養(yǎng)或其他分析。
4、如果只是偶爾做幾次細(xì)胞分選的話，用流式分選還是比較劃算的，只需要準(zhǔn)備樣品和抗體，交納一定的儀器使用費(fèi)即可，不需要購買配套的設(shè)備。

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