国产日产欧美精品-亚洲国产综合久久精品-色综合色国产热无码一-亚洲欧美日本国产,免费观看一区二区三区_在线观看片A免费不卡观看_亚洲а∨天堂久久精品_99久无码中文字幕一本久道

世聯(lián)博研(北京)科技有限公司

Fluicell
美國Flexcell
美國NeuroProbe
法國Sphere Fluidics
kord-valmark
NEW ERA
CWE
IITC
XONA
Flocel
法國CYTOO
美國Celartia
NL50
gembio
美國Orflo
Amerexinst
bioshake
哈佛注射泵
lifescienceproduction
荷蘭enzyscreen
biosearchtech
ISMATEC
kdscientific注射泵
生物反應器
細胞超重培養(yǎng)系統(tǒng)
細胞介電電泳分析系統(tǒng)
VCU顱腦損傷儀
InDevR
德國biosys
恒溫培養(yǎng)箱
IITC動物跑步機
氟表面活性劑
德國SETonic
menicon-lifescience
frontier biosystems
法國kirkstall
ZIVIC
細胞單層應力顯微鏡
monolayer stress microscopy
肌肉運動定量分析系統(tǒng)
鈣瞬態(tài)分析系統(tǒng)
細胞牽引力凝膠微珠基底培養(yǎng)套件
上皮生長動力學量化分析系統(tǒng)
類蠕蟲鏈機械性能量化分析系統(tǒng)
微結構聚丙烯酰胺凝膠涂層蓋玻片
密閉環(huán)境細胞遷移和核膜破裂自動分析系統(tǒng)
MITosis高通量跟蹤表征系統(tǒng)
高力顯微鏡拉伸壓縮測試系統(tǒng)
組織動力學多尺度分析系統(tǒng)
高通量體內外心肌細胞和心肌組織收縮多功能量化跟蹤分析系統(tǒng)
單個心肌細胞收縮力測定系統(tǒng)
神經(jīng)軸突分離培養(yǎng)板
IC200-KIC動態(tài)圖像流式細胞儀
測試儀
法國RITA浸沒式生物反應器

免疫印跡(Western blot)檢測科研實驗技術服務介紹

時間:2024/9/26閱讀:156
免疫印跡(Western blot)檢測


應用簡介
       蛋白質免疫印跡法(WesternBlot),簡稱WB,是指通過SDS-PAGE膠將不同分子量的蛋白質分離開,然后將目標蛋白轉移到載體(PVDF)膜上,利用抗原抗體的特異性結合,用特異性的一抗結合目標蛋白,用HRP標記的二抗結合一抗,再加以ECL發(fā)光液顯色,檢測組織或者細胞內某種或者某些特異性蛋白質的表達。蛋白質免疫印跡是做蛋白質分析的一種常規(guī)技術,常用于鑒定某種蛋白,并能對蛋白進行定性和半定量分析,還可以用于蛋白質-蛋白質、蛋白質-DNA、蛋白質-RNA相互作用后續(xù)分析。WB技術現(xiàn)已廣泛應用于蛋白水平的表達研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個研究領域。
技術原理
       通過SDS-PAGE凝膠將細胞或生物樣品內的蛋白按照蛋白分子量從大到小規(guī)律分離開。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜或PVDF膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原,與對應的抗體起免疫反應,再與酶或同位素標記的第二抗體起反應(目前主要用HRP標記的第二抗體),經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分(目前主要使用魯米諾和二抗中的HRP反應發(fā)出熒光,通過儀器或者膠片顯色)。該技術廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。
實驗方法

 
常見問題
       1、WB有什么優(yōu)點?
       靈敏,可達ng級,用ECL顯色法可達pg級。靈敏,相對便宜且特異性高。
       2、細胞提取液有的有沉淀,有的很清亮,為什么呢?
       有沉淀可能因為蛋白沒有變性晚全,可以適當提高SDS的濃度,同時將樣品煮沸時間延長,一般需96℃以上10-15min左右;也不排除抗原濃度過高,這時需再加入適量上樣緩沖液。
       3、膠片背景很臟,有什么解決方法?
       減少抗原上樣量,降低一抗?jié)舛?,改變一抗孵育時間和溫度(盡量4℃過夜,此孵育條件比37℃1h要溫和很多),并提高封閉液濃度。
       4、目標帶是空白,周圍有背景,是為什么?
       一抗?jié)舛容^高,二抗上HRP催化活力太強,同時顯色底物處于一個臨界點,反應時間不長,將周圍底物催化完,形成了空白即“反亮現(xiàn)象"。將一抗和二抗?jié)舛冉档停蚋鼡Q新進口的顯色底物。
       5、電泳中常出現(xiàn)的一些現(xiàn)象:
       ①“︶"條帶呈笑臉狀
原因:凝膠不均勻冷卻,中間冷卻不好;電泳系統(tǒng)溫度偏高,而且電場強度太大(電泳的電場大致呈現(xiàn)U形,所以因為趕時間而加大電壓可能會出現(xiàn)這個)。
       ②“︵"條帶呈皺眉狀
       原因:可能是由于裝置不合適,特別可能是凝膠和玻璃擋板底部有氣泡,或者兩邊聚合不晚全。
       ③條帶拖尾
       原因:樣品溶解不好,或存在一定程度地蛋白降解。
       ④紋理(縱向條紋)
       原因:樣品中含有不溶性顆粒,可能抽提蛋白時出了問題。
       ⑤條帶偏斜
       原因:電極不平衡或者加樣位置偏斜,一定要子平面臺子上電泳,膠要做好。
       ⑥條帶兩邊擴散
       原因:加樣量過多,彌散至孔周圍了,減少上樣量或者使用5X上樣緩沖液。
 


會員登錄

X

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
撥打電話
在線留言
天等县| 义乌市| 海城市| 永清县| 鹤岗市| 枞阳县| 新邵县| 新绛县| 武陟县| 宁津县| 日喀则市| 榆树市| 陕西省| 宣化县| 吐鲁番市| 阿荣旗| 阿坝| 财经| 蓝山县| 屯门区| 郑州市| 山丹县| 定陶县| 新河县| 肇庆市| 高邮市| 池州市| 册亨县| 当涂县| 凌源市| 璧山县| 武川县| 雷波县| 顺义区| 铜陵市| 平阴县| 衡南县| 临夏县| 永寿县| 潞城市| 禹城市|