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详细介绍
LifeAct-TagGFP2蛋白
LifeAct-TagGFP2蛋白
应用领域
- 细胞骨架组织
- 无毒肌动蛋白可视化
- 荧光染色
- 细胞骨架动力学
- 细胞过程中的肌动蛋白动力学
- 活细胞成像和显微镜
技术指标
| 形成 | 冻干 |
| 存储 | -80°摄氏度 |
| TagGFP2（Ex max / Em max） | 483/506纳米 |
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请在此处找到有关肌动蛋白可视化的更多详细信息。
在此处下载完整的“ Actin可视化”应用指南，以PDF格式。
技术特点
- 重组蛋白，冻干
- C端His标签
- 建立活细胞和固定细胞中F-肌动蛋白染色的规程
- 出色的信噪比
- 具有出色生物相容性的活体样品的无毒F-肌动蛋白染色
LifeAct是一种17个氨基酸的肽，来源于酿酒酵母蛋白。LifeAct可以染色活的或固定的真核细胞中的丝状肌动蛋白（F-actin）结构。
请在此处找到有关LifeAct的详细信息。
使用LifeAct-TagGFP2蛋白在活细胞中可视化F-肌动蛋白
LifeAct-TagGFP2蛋白非常适合快速有效地可视化活细胞中的细胞骨架。对于染色过程，您可以使用任何适用于您感兴趣的细胞的蛋白质转移方法。
注意：请记住，与mRNA或DNA转染相比，蛋白质转染后细胞内蛋白质的实际含量通常较低。为了充分可视化细胞内F-肌动蛋白，您应该使用高质量的显微镜设备。
LifeAct-TagGFP2蛋白转移后，Rat1成纤维细胞中F-肌动蛋白的活细胞成像（30 µg / ml，3分钟）。
肌动蛋白细胞骨架的超分辨显微镜（STED）
使用LifeAct-TagGFP2蛋白，可以详细显示肌动蛋白的细胞骨架。在该实验中，将固定的Rat1成纤维细胞与LifeAct-TagGFP2蛋白在µ-Slide VI 0.4 ibiTreat中孵育。进行了模拟发射损耗（STED）显微镜检查，以创建超分辨率图像。
使用LifeAct-TagGFP2蛋白对Rat1成纤维细胞中肌动蛋白细胞骨架的超分辨率显微镜检查。显微镜是在STEDYCON超分辨率STED纳米显微镜系统（德国哥廷根Abberior Instruments GmbH）上使用Plan-Neofluar 100x / 1.4物镜进行的。
使用LifeAct-TagGFP2蛋白在固定细胞中观察F-肌动蛋白
除了在活细胞中工作外，LifeAct-TagGFP2蛋白还是一种快速简便的解决方案，可在多种固定细胞中进行高效F-肌动蛋白染色。
注意：在固定过程中，甲醇和丙酮会破坏肌动蛋白。因此，建议避免与LifeAct-TagGFP2蛋白结合使用任何含甲醇或丙酮的固定剂。
CHO-K1
HT1080
MCF7
大鼠1
用Triton X-100渗透福尔马林固定的细胞，并在LifeAct-TagGFP2蛋白溶液（PBS中10 µg / ml）中孵育1小时。
方法比较：使用LifeAct在活细胞中可视化F-Actin
LifeAct-Plasmid | LifeAct-mRNA | LifeAct蛋白 | LifeAct- | LifeAct- | |
| 方法适用于1 | |||||
| 细胞系 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
| 原代细胞 | + | +++ | ++ | +++ | +++ |
| 非哺乳动物细胞 | -- | + | + | -- | -- |
| 转染稳定性 | |||||
| 短暂的 | 是 | 是 | 是 | 是 | 没有 |
| 稳定 | 是 | 没有 | 没有 | 没有 | 是 |
| 协议与分析 | |||||
| 协议简单 | +++ | ++ | ++ | +++ | +++ |
| LifeAct读出开始 | 1-2天 | 几个小时 | 几分钟 | 1-2天 | 1-2天 |
| LIFEACT读出持续时间 | 几天 | 几天 | 多1天 | 几天 | 几天 |
| 信号强度 | +++ | +++ | + | +++ | +++ |
| 额外好处 | |||||
| 防止过度表达的 假象 | -- | + | +++ | + | + |
| 预防病毒反应 | +++ | +++ | +++ | -- | -- |
| 转移 方法的生物相容性 | + | +++ | +++ | ++ | ++ |
| 肌动蛋白功能 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
| 安全考虑 | |||||
| 生物安全等级 | BSL1 | -- | -- | BSL2 | BSL2 |
1并非所有这些组合都已在所有指示的细胞类型中进行了测试。我们鼓励您使用此表作为指导，以了解如何地使用LifeAct系统。
注：杨清辰发布
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