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技術(shù)文章
細(xì)胞遷移研實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)介紹
閱讀：86 發(fā)布時(shí)間：2024-9-19
應(yīng)用簡(jiǎn)介
遷移是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過(guò)程中bi不可少的環(huán)節(jié)之一。腫瘤細(xì)胞與母體瘤分離，穿越血管壁，侵襲周邊正常組織時(shí)，需要一定的運(yùn)動(dòng)能力。高轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞通常具奮較強(qiáng)的運(yùn)動(dòng)性。多種物質(zhì)可剌激腫瘤細(xì)胞的遷移，如腫瘤細(xì)胞分泌因子、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞外基質(zhì)成分(FN、LN)以及一些癌轉(zhuǎn)移靶器官的代謝產(chǎn)物或分泌產(chǎn)物等生長(zhǎng)因子對(duì)腫瘤細(xì)胞有趨化作用，可使其發(fā)生定向運(yùn)動(dòng)。測(cè)定方法以細(xì)胞劃痕法和Transwell小室法。
技術(shù)原理
細(xì)胞劃痕法是簡(jiǎn)捷測(cè)定細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)與修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型，在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上，用微量槍頭或其他硬物在細(xì)胞生長(zhǎng)的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時(shí)間，取出細(xì)胞培養(yǎng)板，觀察周邊細(xì)胞是否生長(zhǎng)至中央劃痕區(qū)，以此判斷細(xì)胞的生長(zhǎng)遷移能力，實(shí)驗(yàn)通常需設(shè)定正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別，通過(guò)不同分組之間的細(xì)胞對(duì)于劃痕區(qū)的修復(fù)能力，可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。
實(shí)驗(yàn)方法
【注意事項(xiàng)】
1、鋪細(xì)胞最好使用6孔板，因?yàn)?空板可以保證有相當(dāng)距離的平直劃痕，因?yàn)橛?條定位線，與劃痕相交，這樣就有10個(gè)可固定監(jiān)測(cè)點(diǎn)，不作重復(fù)，誤差也很小。
2、如果連續(xù)監(jiān)測(cè)24小時(shí)，需要考慮到劃痕縮小是細(xì)胞遷移和細(xì)胞繁殖共同作用的結(jié)果，而不是單純的細(xì)胞遷移。如果要單純的考慮細(xì)胞遷移，可以先用si裂霉素（1μg/ml）處理一小時(shí)，抑制細(xì)胞的分裂，這樣結(jié)果就是細(xì)胞遷移的作用了。另外，使用無(wú)血清培養(yǎng)基也可以降低增殖對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
3、照片拍完之后，可以用imageJ來(lái)測(cè)量劃痕區(qū)域的像素定量比較細(xì)胞遷移的速度。
4、雖然無(wú)血清培養(yǎng)可以忽略細(xì)胞增殖的影響，但是由于細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)整體性的下調(diào)節(jié)，細(xì)胞遷移的速度也會(huì)慢很多。
【常見問(wèn)題】
細(xì)胞劃痕時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞沒(méi)有長(zhǎng)滿，或是長(zhǎng)的太滿？
R鋪板時(shí)的數(shù)量須根據(jù)細(xì)胞的形態(tài)、增殖速度、大小進(jìn)行調(diào)節(jié)，細(xì)胞較小或增殖速度慢，鋪板數(shù)量需多于6×105個(gè)細(xì)胞/孔；細(xì)胞較大或增殖速度較快則需少于6×105個(gè)細(xì)胞/孔；
細(xì)胞鋪板時(shí)，前面鋪的孔細(xì)胞密度稀，后面鋪的孔細(xì)胞密度密？
R細(xì)胞鋪板，細(xì)胞單細(xì)胞懸液混合后，鋪板過(guò)程中需要邊鋪板邊晃動(dòng)管子，保證細(xì)胞在懸液中均勻分布；
拍出來(lái)的照片背景顏色不一或亮度不一？
R在拍照前進(jìn)行白平衡；固定曝光時(shí)間。作為腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移研究中的重要角色，這個(gè)任重道遠(yuǎn)的過(guò)程需要很多bi不可少的步驟，準(zhǔn)確易行也是對(duì)實(shí)驗(yàn)的要求之一。