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茁彩生物?走進EdU系列熒光染色
閱讀：903 發(fā)布時間：2023-5-23細胞增殖、細胞周期、細胞毒性、DNA復(fù)制及修復(fù)、信號通路等是測定DNA合成情況研究方向的常用方法之一，用到的檢測試劑主要是胸腺嘧啶核苷酸類似物（BrdU 、EdU ），兩種試劑在檢測方面有一些不同之處。
BrdU免疫檢測需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合，
EdU因為其炔羥基團可以與一些熒光染料發(fā)生“Click"化學(xué)反應(yīng)，無需變形，從而將細胞標記上熒光，因此應(yīng)用更廣泛。
EdU和Brdu檢測區(qū)別
Brdu 檢測增殖細胞的特點及原理
Brdu(5-bromodeoxyuridine)是一種假核苷酸，它被用來檢測細胞增殖。它可以通過與正常DNA堿基結(jié)合，從而替換掉正常DNA。Brdu在細胞分裂時被復(fù)制到DNA中，并在細胞內(nèi)存在一段時間，因此它可以用來指示哪些細胞正在增殖。
Brdu檢測的基本原理是：在細胞增殖過程中，Brdu會被復(fù)制到DNA中，并與DNA堿基結(jié)合。這些DNA含有Brdu的細胞可以通過免疫組化或FISH技術(shù)被檢測出來。
Brdu的檢測可以用于研究細胞的生長和分裂，也可以用于檢測癌癥細胞的增殖和活動。例如，Brdu可以用來檢測腫瘤細胞中的DNA損傷，以及化療藥物對腫瘤細胞的作用。
Brdu也可以用于檢測免疫系統(tǒng)中的細胞，例如檢測T細胞增殖以及抗原激活的活性T細胞。此外，Brdu也可以用來檢測神經(jīng)細胞的發(fā)育。
Brdu檢測是一種有效的檢測細胞增殖的方法，它可以用來研究細胞的生長、分裂和發(fā)育，以及腫瘤細胞的活動和化療藥物的作用。
EdU 檢測增殖細胞的特點及原理
EdU（５‐ethynyl‐２′‐deoxyuridine，５‐乙炔基‐２′脫氧尿嘧啶核苷）也是一種胸腺嘧啶核苷的類似物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)特點是脫氧胸腺嘧啶環(huán)上與５位C原子相連的甲基被乙炔基取代，在S期細胞增殖時可作為底物摻入到正在復(fù)制的DNA鏈中，
EdU在細胞增殖時能夠插入正在復(fù)制的DNA分子中，基于EdU與染料的共軛反應(yīng)可以有效地檢測處于S期的細胞百分數(shù)。熒光染料可以同EdU發(fā)生“Click"化學(xué)反應(yīng)（點擊法），從而將增殖的細胞標記上熒光?？捎糜诩毎上?、流式、細胞示蹤、DNA損傷修復(fù)檢測、線粒體活性檢測以及病毒增殖活性檢測等，EdU亦適用于活體注射，穩(wěn)定，對活體沒有副作用。
與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比，EdU檢測法更簡單、更快速、更準確，不需要嚴格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理，有效地避免了樣品損傷，有助于在組織、器官的整體水平上觀測細胞增殖的真實情況，具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。
EdU和Brdu檢測區(qū)別見下表
Edu | Brdu | |
|---|---|---|
分子量大小 | 252.22 g·mol?1 | 307.098 g·mol?1 |
標記檢測方式 | 化學(xué)反應(yīng)（點擊法） | 免疫反應(yīng) |
是否影響其他標記 | 不影響 | 影響 |
DNA是否變性 | 否 | 是 |
標記檢測時長 | ≤2.5 h | 過夜 |
檢測靈敏度 | 高 | 一般 |
EdU檢測的優(yōu)點：
1、更簡單：僅需EdU孵育；無需抗原抗體反應(yīng)，基于小分子化學(xué)反應(yīng)的檢測方法簡單高效，反應(yīng)僅需要幾分鐘；
2、更靈敏：無需抗體，檢測染料僅BrdU抗體的1/500,很容易擴散，即便是單個增殖細胞也能準確檢測；
3、更快速：無需過夜，省卻了抗原抗體反應(yīng)的復(fù)雜繁瑣步驟，只需2.5 h；
4、更準確：無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免變性帶來的樣品損傷，確保細胞核邊緣清晰完整；
5、更兼容：允許與多種抗體、熒光染料同時標記；對樣品幾乎無損傷，更容易與多種抗體或熒光蛋白同時標記，能夠同時檢測細胞其他性狀特征；
6、應(yīng)用性廣，細胞成像、流式、細胞示蹤、DNA損傷修復(fù)檢測、病毒增殖活性檢測，適用于各種動物細胞檢測，對植物細胞亦適用。