化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
茁彩生物｜一步法Elisa換新裝
閱讀：1657 發(fā)布時(shí)間：2022-2-23
首先，帶大家溫故下酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，簡寫ELISA），此方法可用于研究領(lǐng)域中的許多靶標(biāo)，包括細(xì)胞因子，趨化因子，生長因子，磷酸特異性靶標(biāo)，免疫球蛋白，免疫腫瘤學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)。由于技術(shù)方法成熟，操作流程簡單，此方法學(xué)深受廣大科研工作者青睞。
那么,ELISA實(shí)驗(yàn)中具體又分為哪幾種檢測類型呢？
01 夾心法
①將含有已知抗體的抗血清吸附在微量滴定板上的小孔里，洗滌一次；
②加待測抗原，如兩者是特異的，則發(fā)生結(jié)合，然后把多余抗原洗除；
③加入與待測抗原呈特異反應(yīng)的酶聯(lián)抗體，使形成“夾心"；
④加入該酶的底物，若看到有色的酶解產(chǎn)物產(chǎn)生，說明在孔壁上存在相應(yīng)的抗原。
02 間接法
此法是檢測抗體常用的方法。將已知抗原吸附于固相載體上，加入待測血清(抗體)與之結(jié)合，洗滌后，加酶標(biāo)抗體和底物進(jìn)行測定。
03 競爭法
此法主要用于小分子物質(zhì)、激素、藥物及半抗原的定量測定。以測定抗原為例，將特異性抗體吸附于固相載體上，加入待測抗原和一定量的已知酶標(biāo)抗原，使二者競爭地與固相抗體結(jié)合，經(jīng)過洗滌分離，最后結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原與待測抗原含量呈負(fù)相關(guān)。
到這里我們應(yīng)該會問一句，什么叫“一步法" ？
不要著急，小Z先用“一步法"跟傳統(tǒng)方法做個對比：
以上圖例，相信大家很明顯的看出“一步法"優(yōu)化了操作步驟，縮減了操作時(shí)間，避免了不必要的誤差。
此刻你們腦海里面應(yīng)該飄過很多問號吧？
小Z再給你們剖析一下“一步法" 的優(yōu)化方案
梯度標(biāo)準(zhǔn)品（即用型）試劑盒提供已知濃度的6支標(biāo)準(zhǔn)品，可直接使用；
樣本充足的情況下，離心后可以直接加樣，無需樣本稀釋，避免污染；
一次性洗板，簡約時(shí)間，減少誤差；
直接讀數(shù)，90分鐘搞定ELISA，實(shí)現(xiàn)時(shí)間上“質(zhì)"的飛躍；
