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HitHunter® cAMP 檢測(cè)試劑盒手冊(cè)簡(jiǎn)介

閱讀：872 發(fā)布時(shí)間：2023-06-30

HitHunter cAMP 檢測(cè)小分子試劑盒提供了一種穩(wěn)健、高靈敏度且易于使用的檢測(cè)方法，用于根據(jù)細(xì)胞中 3'-5'-環(huán)單磷酸腺苷 (cAMP) 的產(chǎn)生來(lái)監(jiān)測(cè) G 蛋白偶聯(lián)受體 (GPCR) 的激活。該試劑盒非常適合篩選和分析小分子。對(duì)于測(cè)試生物制劑樣品（例如血清或血漿中的粗制生物樣品、純化或未純化的抗體[抗配體或抗受體]以及雜交瘤上清液），我們建議使用專為生物制劑設(shè)計(jì)的 HitHunter cAMP Assay for Biologics和大分子應(yīng)用。其他來(lái)源的細(xì)胞系也與 HitHunter cAMP 檢測(cè)兼容。

技術(shù)原理

配體結(jié)合后的GPCR激活啟動(dòng)了一系列的第二信使級(jí)聯(lián)，從而導(dǎo)致細(xì)胞反應(yīng)。該信號(hào)傳導(dǎo)涉及一種被稱為腺苷酸環(huán)化酶的膜結(jié)合酶。Gαs -和Gαi -偶聯(lián)受體分別通過(guò)抑制或刺激腺苷酸環(huán)化酶來(lái)調(diào)節(jié)cAMP。在HitHunter cAMP實(shí)驗(yàn)中，過(guò)表達(dá)GPCRs的細(xì)胞利用GPCR的自然偶聯(lián)狀態(tài)來(lái)監(jiān)測(cè)Gα的激活s -和Gαi -耦合受體。在配體刺激后，通過(guò)使用基于酶片段互補(bǔ)（EFC）技術(shù)的同質(zhì)（無(wú)洗滌）、信號(hào)獲得競(jìng)爭(zhēng)性免疫分析法測(cè)量細(xì)胞cAMP水平來(lái)監(jiān)測(cè)GPCR的功能狀態(tài)。

GPCR cAMP路徑

在該實(shí)驗(yàn)中，來(lái)自細(xì)胞的cAMP和ED標(biāo)記的cAMP（ED-cAMP）競(jìng)爭(zhēng)抗cAMP抗體（Ab）結(jié)合位點(diǎn)?？贵w結(jié)合的ED-cAMP不能與EA互補(bǔ)，但未結(jié)合的ED-cAMP可以自由地補(bǔ)充EA形成活性酶，隨后產(chǎn)生發(fā)光信號(hào)。所產(chǎn)生的信號(hào)量與細(xì)胞中cAMP的信號(hào)量

成正比。HitHunter cAMP分析EFC技術(shù)使用了一種β-半乳糖苷酶（β-gal）酶，它被分成兩個(gè)片段，酶供體（ED）和酶受體（EA）。這些片段獨(dú)立地沒(méi)有β -gal活性；然而，在溶液中，它們迅速補(bǔ)充形成一個(gè)活性的β -gal酶。HitHunter的cAMP檢測(cè)試劑盒提供了一種強(qiáng)大的、高靈敏度的、易于使用的、基于細(xì)胞的功能檢測(cè)方法，通過(guò)cAMP的產(chǎn)生來(lái)研究GPCR的活性。該試劑盒包含了檢測(cè)表達(dá)Gα的cAMPHunter™細(xì)胞中cAMP所需的所有試劑s -和Gαi由小分子配體誘導(dǎo)的-偶聯(lián)受體。該柔性檢測(cè)系統(tǒng)已被設(shè)計(jì)用于96孔和384孔板格式的激動(dòng)劑或拮抗劑模式。

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