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　　以下是關(guān)于大鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明綜合整理：

　　BS-3649 大鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒

　　一、實(shí)驗(yàn)原理

　　采用雙抗體夾心法檢測(cè)樣本中HMGB-1含量。通過包被抗體捕獲目標(biāo)蛋白后，依次加入檢測(cè)抗體和酶標(biāo)記物形成復(fù)合物，最終通過TMB顯色反應(yīng)測(cè)定濃度?。

　　二、樣本處理要求

　　血清?：室溫凝固10-20分鐘后2000-3000rpm離心20分鐘?

　　血漿?：需使用EDTA/檸檬酸鈉抗凝，離心后取上清?

　　組織勻漿?：按重量加入PBS勻漿后離心?

　　保存條件?：建議分裝凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融?

　　三、試劑盒組成

　　包含包被板、標(biāo)準(zhǔn)品(濃度通常為0-160μg/L)、生物素標(biāo)記抗體、鏈霉親和素-HRP、顯色液(TMB)及終止液等?。不同規(guī)格試劑盒組分體積存在差異(如48孔/96孔配置)?。

　　四、操作步驟

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：按說明書梯度稀釋?

　　加樣順序?：依次加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本→檢測(cè)抗體→酶結(jié)合物?

　　溫育條件?：37℃反應(yīng)，具體時(shí)間參照不同試劑盒要求(通常30-60分鐘)?

　　顯色終止?：加入TMB顯色15分鐘后加終止液?

　　五、注意事項(xiàng)

　　濃縮洗滌液需1:20稀釋，使用前需溶解結(jié)晶?

　　避免底物接觸金屬器械，顯色后需立即檢測(cè)OD值?

　　計(jì)算結(jié)果時(shí)需注意樣本稀釋倍數(shù)(通常需×5)?

　　六、結(jié)果計(jì)算

　　在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度?。建議使用專業(yè)酶標(biāo)儀分析?。

　　注：不同品牌試劑盒可能存在參數(shù)差異，請(qǐng)以實(shí)際說明書為準(zhǔn)?。