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大鼠P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)ELISA试剂盒实验使用说明书

时间:2025-4-2阅读:235
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  大鼠P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)ELISA试剂盒的实验使用说明书主要包括以下内容:

  BS-3514  大鼠P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)ELISA试剂盒

  1. 实验原理

  该试剂盒采用双抗体夹心ABC-ELISA法。通过抗大鼠P450 scc单抗包被于酶标板上,标准品和样品中的P450 scc与单抗结合,加入生物素化的抗大鼠P450 scc,形成免疫复合物连接在板上。辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,加入底物工作液显蓝色,最后加终止液硫酸,在450nm处测OD值,P450 scc浓度与OD值成正比,可通过绘制标准曲线求出标本中P450 scc浓度?。

  2. 试剂盒组成

  试剂盒包含以下组分(2-8℃保存):

  标准品液

  生物素化的抗大鼠P450 scc

  辣根过氧化物酶标记的Streptavidin

  底物工作液

  终止液硫酸?。

  3. 样本处理及保存

  血清/血浆?:收集后2-8℃保存48小时,更长时间需冷冻(-20℃或-70℃)保存,避免反复冻融?。

  细胞培养上清液/组织匀浆?:尽早检测,保存条件同上?。

  4. 实验步骤

  准备试剂?:将试剂移至室温平衡至少30分钟?。

  加样?:分别设标准品孔和待测样本孔,每孔加标准品或待测样本100μL,37℃温育2小时?。

  洗涤?:弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡2分钟?。

  加生物素标记抗体?:每孔加生物素标记抗体工作液100μL,37℃温育1小时?。

  加辣根过氧化物酶标记亲和素?:每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液100μL,37℃温育1小时?。

  显色?:每孔加底物溶液90μL,37℃避光显色15-30分钟?。

  终止反应?:每孔加终止溶液50μL,终止反应?。

  读板?:用酶标仪在450nm波长测定各孔的OD值?。

  5. 注意事项

  避免直接接触终止液和底物A、B,一旦接触请尽快用水冲洗?。

  实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品?。

  使用一次性吸头避免交叉污染?。

  洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水?。

  底物A应挥发,避免长时间打开盖子;底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下?。

  6. 结果计算

  通过绘制标准曲线,根据OD值计算样品中P450 scc的浓度?。

  7. 适用范围

  该试剂盒适用于体外定量检测血清、血浆或其他相关生物液体中P450 scc的浓度,仅用于科研实验,禁用于临床?。

  以上内容综合了多个相关网页的信息,确保实验操作的准确性和安全性?。

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