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液相色譜知識科普
一、什么是色譜呢?
色譜的本質(zhì)是一種分離分析方法。常見的分離方法有蒸餾、離心、電泳、過濾等。色譜是目前有效的分離方法之一。
色譜法的原理：
利用混合物中各組份在不同的兩相中溶解、分配、吸附等性質(zhì)的差異，當(dāng)兩相作相對運動時，使各組分在兩相中反復(fù)多次受到各作用力而達到相互分離。
兩相中有一相是固定的，叫作固定相(Stationary Phase)，有一相是流動的，稱為流動相(phase)，流動相又叫洗脫劑、溶劑。
相(Phase)：物理化學(xué)術(shù)語，特指在某一系統(tǒng)中，具有相同成分及相同物理、化學(xué)性質(zhì)的均勻物質(zhì)。各相之間有明顯可分的界面。
二、液相色譜儀的組成
1、輸液系統(tǒng)
包括溶劑柜、真空脫氣機、溶劑混合器、高壓泵等，其中核心部分是泵；泵的作用提供足夠的驅(qū)動力使流動相通過填充緊密的色譜柱。
洗脫方式也分為兩種：
（1）等度洗脫：在同一分析周期內(nèi)流動相組成保持恒定，適合于組分數(shù)目較少，性質(zhì)差別不大的樣品。
（2）梯度洗脫：采用兩種（或多種）不同極性的溶劑，在分離過程中按一定程序連續(xù)改變流動相的濃度配比和極性的一種洗脫模式。用于分析組分數(shù)目多、性質(zhì)差異較大的復(fù)雜樣品。
2、進樣系統(tǒng)
把分析試樣有效地送入色譜柱進行分離。一般有自動進樣器和手動進樣器，進樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的5-10倍（少3倍）。
3、分離系統(tǒng)
主要是色譜柱，色譜柱是一根裝滿填料的管子。色譜柱的材料有不銹鋼、塑料、玻璃等，其尺寸（內(nèi)徑、長短）不盡相同；色譜柱填料主要有硅膠基質(zhì)和聚合物基質(zhì)，填料的粒徑不盡相同。
4、檢測器
對檢測器的要求：靈敏度高、重現(xiàn)性好、線性范圍寬、死體積小、對溫度及流量的變化不敏感等。主要有紫外檢測器、熒光檢測器、示差檢測器等。
示差檢測器是一種通用型檢測器，理論上可以檢測幾乎所有的化合物。其原理是基于含樣品的洗脫劑和洗脫劑二者折光指數(shù)的差異。示差檢測器受壓力變化、溫度變化、流動脈沖的影響較大，不適合進行梯度洗脫。
三、液相色譜儀操作流程
1、開機：依次打開脫氣機、色譜泵、檢測器、計算機電源；待各設(shè)備自檢正常后，啟動色譜管理系統(tǒng)。
2、流動相準(zhǔn)備：過濾，脫氣。
3、色譜泵排氣
4、安裝色譜柱
5、平衡流動相（有機溶劑與緩沖鹽溶液切換時等易產(chǎn)生沉淀，需先使用90%超純水/10%甲醇作為流動相沖洗系統(tǒng)）
6、數(shù)據(jù)采集、進樣
7、沖洗管路及色譜柱
8、數(shù)據(jù)處理
9、關(guān)機
10、記錄相關(guān)信息
四、液相色譜圖名詞術(shù)語
色譜峰(Peak):色譜柱流出組分通過檢測器時產(chǎn)生的響應(yīng)信號。
峰底(Peak Base):峰的起點與終點之間連接的直線。
峰高(Peak Height):峰大值到峰底的距離。
切線峰寬(Peak Width):在峰兩側(cè)拐點處所作切線與峰底相交兩點之間的距離。
半(高)峰寬(Peak Width at Half Height):通過峰高的中點作平行于峰底的直線，其與峰兩側(cè)相交兩點之間的距離。
峰面積(Peak Area):峰與峰底之間的面積，又稱響應(yīng)值。