转基因植物NOS基因荧光定量PCR检测试剂盒【检验原理】

 本试剂盒可用于检测食品或其他材料中是否有转基因植物NOS基因的成分。现代食品加工工艺极大改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性，因此传统的感官鉴别技术已经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。同时部分食材还有致敏性，因此基于基因检测的快速灵敏的食材来源检测技术将对食品监管和安全提供重要的保障。本产品就是为满足这一需求根据 PCR 原理开发的产品。

1. 即开即用，用户只需要提供样品 DNA。

【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）

1.1 样本前处理

固体样本：用粉碎机或冷冻研磨仪将样品研磨至细粉状。

1.2 DNA提取

对于固体标本，DNA的提取可以采用SN/T 2584-2010中推荐的方法：

• 每个样品取2个平行管。称取200mg粉碎的样品，加入1mL预冷至4℃的抽提液，剧烈摇动混匀后，在冰上静止5min，4℃条件下10000g离心15min，弃上清液；

• 加入600uL预热至65℃的裂解液，充分重悬沉淀，在65℃恒温保持40min，期间颠倒混匀5次；

• 室温条件下10000g离心10min，取上清液转移至新离心管中，加入5uLRNAseA，37℃恒温30min，分别用等体积苯酚：异戊醇溶液和三氯甲烷：异戊醇溶液各抽提一次；

• 室温条件下，10000g离心10min，取上清液至新离心管，加入三分之二体积的异丙醇，十分之一体积的3mol/L的乙酸钠溶液（pH=6.5），-20℃放置2-3h；

• 在4℃条件下，10000g离心15min，弃上清液，用70%乙醇洗涤沉淀一次，倒出乙醇，晾干沉淀；

• 加入50uL TE（pH8.0）溶解沉淀，所得溶解即为样品DNA溶液。

也可使用等效的DNA提取试剂盒。

油脂样本请直接选用市售油脂DNA提取试剂盒，按说明操作。

?2. 根据转基因植物NOS基因保守区域设计引物，能专一性地检测出样品中的转基因植物NOS基因成分

运输及保存：

低温运输，-20℃保存，有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时，由于其浓度较高，一定要注意不要污染其他试剂和成分。在专门的区域操作。

1.1 判断

检测通道 Ct 值＜30.0，有 FAM 荧光信号检出，并出现典型的扩增曲线，判断样品为阳性。当30.0≤Ct 值≤35.0 时，且有典型的扩增曲线时，则需重复实验。再次扩增后检测体系的Ct 值仍≤35.0，且有典型的扩增曲线。

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