禽流感病毒H5/H7/H9(H5/H7/H9荧光PCR试剂盒说明书

【产品名称】

商品名称：禽流感病毒H5/H7/H9亚型(AIV-H5/H7/H9)核酸检测试剂盒(实时荧光-PCR法)

Name ：Avian influenza virus H5/H7/H9 subtype (AIV-H5/H7/H9) nucleic acid detection kit (real-time fluorescence-PCR method)

【包装规格】48T/盒

【预期用途】

禽流感是由A型流感病毒所引起的禽类疾病。禽流感病毒H5/H7/H9亚型(AIV-H5/H7/H9)除了感染禽类外，部分亚型也能够引起人感染或发病。野生水禽是禽流感病毒的自然宿主，一般对其不致病，当它们传染给其它物种时有时会造成大的发病率和死亡率。

本试剂盒适用于检测标本中的禽流感病毒H5/H7/H9亚型(AIV-H5/H7/H9)，适用于禽流感病毒H5/H7/H9亚型(AIV-H5/H7/H9)感染的辅助诊断及流行病学调查。

【检验原理】

本试剂盒分别对禽流感病毒H5/H7/H9亚型(AIV-H5/H7/H9)设计特异性的引物和探针，用一步法荧光RT-PCR技术对AIV-H5/H7/H9 RNA进行体外扩增检测。

【试剂组成】

注：

1）不同批号试剂不能混用。

2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于 7 次，有效期 9 个月。

【适用仪器】

ABI 系列 、安捷伦 MX3000P/3005P 、MJ Opticon2 、Eppendorf 2/4 Color Systems、Bio-RadCFX96 等荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

病死或扑杀禽，取喉气管、脑、胸肌、心肌和肺等组织；待检活禽，用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄物，置于 1mL 50%甘油生理盐水中。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】

1.样品处理（样本处理区）

1.1样本前处理

每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中， 8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；棉拭子直接取 100 μL 提取。

1.2RNA 提取

推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的 RNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请按照试剂盒说明书进行操作。

2.试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

3.加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4.PCR 扩增（核酸扩增区）

4.1将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

4.3推荐循环参数设置：

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