猪圆环1型/伪狂犬PCV-2/PRV)荧光PCR试剂盒说明书

【产品名称】

商品名称：猪圆环病毒1型/猪圆环病毒2型/伪狂犬病毒(PCV-1/PCV-2/PRV)核酸检测试剂盒(荧光-PCR法)?

Name ：Porcine circovirus type 1 / porcine circovirus type 2 / pseudorabies virus (PCV-1/PCV-2/PRV) nucleic acid detection kit (fluorescent -PCR method)?

【包装规格】48T/盒

【预期用途】

本试剂盒适用于检测标本中的禽流感病毒 H7N9，适用于禽流感病毒 H7N9 感染的辅助诊断及流行病学调查。

【检验原理】

本试剂盒分别对禽流感病毒 H7N9 亚型的 HA 和 NA 基因设计特异性的引物和探针[2-3]，用一步法荧光 RT-PCR 技术对禽流感病毒 H7N9 RNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

注：

1）不同批号试剂不能混用。

2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。

【储存条件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于 7 次，有效期 9 个月。

【适用仪器】

ABI 系列 、安 捷伦 MX3000P/3005P 、MJ Opticon2、Eppendorf 2/4 Color Systems、Bio-RadCFX96 等荧光定量 PCR 检测仪。

【标本采集】

病死或扑杀禽，取喉气管、脑、胸肌、心肌和肺等组织；待检活禽，用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄物，置于 1mL 50%甘油生理盐水中。

【保存和运输】

上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）

1.1样本前处理

每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中；棉拭子直接取 100μL 提取。

1.2RNA 提取

推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的 RNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请按照试剂盒说明书进行操作。

2. 试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对

照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

试剂 AIV-H7N9 反应液 酶液

用量 20μL 1μL

将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。

3. 加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反

应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

7. 质控标准

阴性质控品：无明显扩增曲线且无 Ct 值显示；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32；

以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

【参考文献】

[1] Morens D M, Taubenberger J K, Fauci A S. H7N9 avian influenza A virus and the perpetual challenge of potential human pandemicity [J]. MBio，2013, 4(4): e00445-13. [2] 罗思思, 谢芝勋, 刘加波, 等. H7N9 亚型 AIV 双重实时荧光定量 RT-PCR 检测方法的建立[J]. 动物医学进展, 2013, 34(12):1-5. [3] 徐晓龙, 包红梅, 马 勇, 等. H7 和 N9 亚型及 A 型流感病毒多重荧光 RT-PCR 检测方法的建立[J].中国预防兽医学报, 2014, 12, 36: 939-942.

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