牛支原体（MYPB）荧光PCR核酸检测试剂盒说明书

【产品名称】

通用名称：牛支原体（MYPB）核酸扩增检测试剂盒(PCR 荧光探针法)

Name ：Mycoplasma bovis (MYPB) nucleic acid amplification kit (PCR fluorescence probe method)

【包装规格】48T/盒

【预期用途】

本试剂盒适用于检测全血等样本中的牛支原体（MYPB），用于牛支原体（MYPB）感染的辅助诊断，其检测结果仅供参考。

【检验原理】

本试剂盒用一对牛支原体（MYPB）特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR 技术对牛支原体（MYPB）的核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

【储存条件和有效期】

试剂盒保存于-20±5℃，有效期 12 个月；

避免反复冻融，冻融次数不超过 5 次；试剂开瓶后，在室温条件下放置时间不应超过 8 小时；运输采用干冰（或者冰袋）保持低温，运输时间不应超过 4 天。试

剂盒生产日期见产品标签。

【标本要求】

标本采集：用注射器取血 5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管

保存运输：上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）

1.1样本前处理

取抗凝血下层血细胞 50uL，加入 100uL 双蒸水吹匀

1.2DNA 提取

1) 对上述处理好的标本加入等体积核酸提取液（固体标本加入50uL核酸提取液），

100℃恒温处理 10 分钟，13,000 rpm 离心 5 分钟，取上清液转移至新的 1.5ml

EP 管，-20℃保存；

2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂

盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。

2. 试剂配制（试剂准备区）

根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性

对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：

3. 加样（样本处理区）

将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μl，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

5. 结果分析判定

5.1结果分析条件设定

设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出

现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围

内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上

下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

8. 产品性能指标

阴阳性参考品符合率：8 份阳性参考品符合率为 100％；10 份阴性参考品符合

率为 100％。

低检测限：2.0×102copies/ml。

4. PCR 扩增（核酸扩增区）

4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；

4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25ul；

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