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原代細(xì)胞的培養(yǎng)質(zhì)量至關(guān)重要
原代細(xì)胞的培養(yǎng)是指直接從機(jī)體取下細(xì)胞、組織和器官后立即進(jìn)行培養(yǎng)。因此，較為嚴(yán)格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì)，如果是正常細(xì)胞，仍然保留二倍體數(shù)。但實(shí)際上，通常把一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)，是細(xì)胞培養(yǎng)中很重要的，其質(zhì)量決定著傳代細(xì)胞的質(zhì)量，因此它的培養(yǎng)的質(zhì)量至關(guān)重要。
原代細(xì)胞是非常敏感的細(xì)胞，需要傳統(tǒng)培養(yǎng)基之外的額外營養(yǎng)物質(zhì)。為了優(yōu)化存活和生長，需要針對每種細(xì)胞類型選擇特定的培養(yǎng)基。例如，內(nèi)皮細(xì)胞對營養(yǎng)的需求與上皮細(xì)胞或神經(jīng)元有很大區(qū)別，因此需要特制的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基。而傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)基依靠血清提供生長因子、激素、脂質(zhì)和其他的未知組分，以支持細(xì)胞的生長。但對于原代細(xì)胞，高血清水平可導(dǎo)致細(xì)胞分化，或促進(jìn)污染細(xì)胞如成纖維細(xì)胞的生長。
此外，添加血清也受到成本上升及不同批次間差異性的困擾。配制具有很少或沒有血清的特殊培養(yǎng)基則可以避免這些問題，并且更加有利于促進(jìn)特定類型細(xì)胞的生長。此外，其他一些實(shí)踐，例如在更多的生理學(xué)相關(guān)底物上接種原代細(xì)胞而不是使用合成聚合物，可以顯著的促進(jìn)細(xì)胞貼壁、增殖及保持純度。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1.試劑耗材準(zhǔn)備；
2.取新鮮動物組織；
3.酶消化；
4.過濾網(wǎng)篩選、分離細(xì)胞；
5.加培養(yǎng)液，37℃、5%CO2培養(yǎng)；
6.傳代；
7.凍存；
8.復(fù)蘇。
應(yīng)用：
1.為研究生物體細(xì)胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段；
2.為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件；
3.服務(wù)于臨床實(shí)踐，用于藥物篩選等。