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革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰氏染色属复染法。
革兰氏染色液原理：
通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。染色的差异主要是由于阴性与阳性细菌细胞壁的差异所引起的。
革兰氏染色液材料：
1.葡萄球菌和大肠杆菌混合菌液。
2.结晶紫染色液
3.革兰氏碘液
4.95%酒精。
5.番红染液
6.载玻片方法、涂片标本的制备（见实验一）
革兰氏染色法1.初染：在上述已固定的涂片上，滴加结晶紫染液，染色1分钟，水洗。
2.媒染：滴加革兰氏碘液，作用1-3分钟，水洗3.脱色：滴加95%酒精，并频频摇动玻片，至无紫色脱出为止（约20秒），水洗复染：加番红染液，复染半分钟，水洗，用吸水纸印干后，油镜检查结果：视野中可以察见两种细菌葡萄球菌：紫色、球形、葡萄状排列。
大肠杆菌：红色、杆状、散在排列。
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