EHA105农杆菌电转感受态细胞

EHA105 Electroporation-Competent Cell
产品编码：                        保存条件： -80℃   
产品规格:

                
EHA105农杆菌电转感受态细胞基因型;
C58 (rif ^R) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) (strep^R) Succinamopine

EHA105农杆菌电转感受态细胞简要说明：
 EHA105菌株由EHA101菌株改造而来，为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) ，此质粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移）。
pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：strep，赋予EHA105菌株链霉素抗性，适用于水稻、烟草等植物的转基因操作。
开发的EHA105电转感受态特别适用于大质粒的转化：经pCAMBIA2301质粒(size:11633bp)检测转化效率可达5×10⁴cfu/μg；经pCAMBIA2301-ZH质粒（size:40kd）检测转化效率可达5×10³cfu/μg。

EHA105农杆菌电转感受态细胞操作说明：
1. 0.2cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。

1.  取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟，待其融化，加入1-5ug质粒DNA（质粒体积不大于6ul，用试剂盒抽提，双蒸水溶解），用手管底混匀，立即插入冰中，用200ul枪头将感受态-质?；旌衔锟焖僖频降缁鞅?，盖上杯盖，空管保留待用。
2.  启动电转仪，设置参数：C=25uF，PC=200ohm，V=2400V（此参数为Biorad 推荐，使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中，加入700ul 无抗生素的LB并转移到感受态空管中，28℃振荡培养2~3小时。

4. 6000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天（当平板只含有50ug/ml kan 时，28℃培养48h即可；平板中同时加入50ug/ml kan，20ug/ml rif 时，需28℃培养60h；如果使用的平板含有50ug/ml rif 则需要28℃培养72-90h）。