OrigamiB(DE3)感受态细胞

OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell

产品编码：                        保存条件： -80℃   
产品规格:

OrigamiB(DE3)感受态细胞基因型：

F^-ompT hsdS_B(r_B^-m_B^-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (Kan^R,Tet^R)

 

OrigamiB(DE3)感受态细胞简要说明：

 OrigamiB(DE3)感受态细胞包含突变的硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase）(trxB) 和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase)(gor)基因，表达主要还原途径的两个关键酶。有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。 
该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区（DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶），可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，具有卡那霉素和四环素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。
OrigamiB (DE3) 感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率达10⁸cfu/μg。
 
 

OrigamiB(DE3)感受态细胞操作说明：

1.  取100μl冰上融化的OrigamiB(DE3)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。

2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。

1.  向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。

4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

1.  将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

OrigamiB(DE3)感受态细胞注意事项：

1.   感受态细胞在冰上融化。
2.  混入质粒时应轻柔操作。
3.  转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量。
4.  诱导时，IPTG浓度可?。?/span>0.1-2mM均可）。
5.  为获得需要量的蛋白，诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。

6. 具有卡那霉素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。