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为了系统的剖析Greek island的相互作用,作者探讨了这些增强子核心序列的作用。在mOSNs的原位Hi-C中, islands H(2kb)、Lipsi(1kb)和Sfaktiria (0.6 kb)的纯合子缺失,在包含这些缺失的基因组bins和剩余的Greek islands之间反式相互作用减少,这种效应延伸至较宽的基因组距离(图2a-c)。值得注意的是,积累的反式Greek island接触减少与在细胞中观察到的OR基因的转录下调相关图2c)。小至0.6 kb的DNA在数百个碱基上协调基因组接触,类似于ZIP元素影响酵母菌或Igk增强子的核定位,从而影响了pre-B细胞中免疫球蛋白位点的定位。三重增强子删除对集群的影响表明,这些额外的序列参与OR集群之间的交互。
3. 蛋白质的区域化调节
接下来,作者研究了Greek-island-bound结合转录因子在ORs区隔中的作用,在水平基底细胞(HBCs)中删除LHX2,然后用甲基咪唑诱导这些细胞分化,以TdTomato强度为标记,鉴定了细胞群体,其中暗的是由HBC-衍生的INPs和mOSNs组成。荧光活化细胞FAC-sorted的RNA测序(RNA-seq)结果显示,LHX2的早期缺失导致嗅觉神经元(OSN)谱系发育迟缓,INP-特异性标志物增多??悸堑椒只毕莺涂赡艿南赴晔侗浠?,FAC-sorted细胞反式OR和反式 Greek island 接触明显减少(图3a-d)。在早期的LHX2敲除细胞中,染色体间相互作用的频率仍然很高,但在1000个锥虫的反式接触中OR-OR接触仅占16%。在mOSNs中LHX2的晚期缺失也减少了反式OR接触,但没有早期缺失多(图3a, c)。LHX2的缺失使Greek islands之间的反式接触和远距离顺式接触减少(图3b, d),与OR下调相*。