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日本生研單增李斯特菌診斷血清分型血清
廣州健侖生物科技有限公司
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廣州健侖生物有代理日本生研、丹麥SSI、德國Sifin、泰國血清:
我司還提供其它進口或國產試劑盒:登革熱、瘧疾、流感、A鏈球菌、合胞病毒、腮病毒、乙腦、乙肝、寨卡、黃熱病、黑熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團菌等試劑盒以及日本生研細菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清等產品。
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60-65℃是雙鏈DNA復性及延伸的中間溫度,DNA在65℃左右處于動態(tài)平衡狀態(tài)。因此,DNA在此溫度下合成是可能的。利用4種特異引物依靠一種高活性鏈置換DNA聚合酶。使得鏈置換DNA合成在不停地自我循環(huán)。擴增分兩個階段。
第1階段為起始階段,任何一個引物向雙鏈DNA的互補部位進行堿基配對延伸時,另一條鏈就會解離,變成單鏈。上游內部引物FIP的F2序列首先與模板F2c結合,在鏈置換型DNA聚合酶的作用下向前延伸啟動鏈置換合成。外部引物F3與模板F3c結合并延伸,置換出完整的FIP連接的互補單鏈。FIP上的F1c與此單鏈上的Fl為互補結構。自我堿基配對形成環(huán)狀結構。以此鏈為模板。下游引物BIP與B3先后啟動類似于FIP和F3的合成,形成啞鈴狀結構的單鏈。迅速以3' 末端的Fl區(qū)段為起點。以自身為模板,進行DNA合成延伸形成莖環(huán)狀結構。該結構是LAMP基因擴增循環(huán)的起始結構。
第2階段是擴增循環(huán)階段。以莖環(huán)狀結構為模板,FIP與莖環(huán)的F2c區(qū)結合。開始鏈置換合成,解離出的單鏈核酸上也會形成環(huán)狀結構。迅速以3’末端的B1區(qū)段為起點,以自身為模板。進行DNA合成延伸及鏈置換.形成長短不一的2條新莖環(huán)狀結構的DNA,BIP引物上的B2與其雜交。啟動新一輪擴增。且產物DNA長度增加一倍。在反應體系中添加2條環(huán)狀引物LF和LB,它們也分別與莖環(huán)狀結構結合啟動鏈置換合成,周而復始。擴增的后產物是具有不同個數莖環(huán)結構、不同長度DNA的混合物。且產物DNA為擴增靶序列的交替反向重復序列。