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技術(shù)文章

利用HILIC 定量分析中國(guó)益母草-植物中極性化合物的分析

閱讀:854          發(fā)布時(shí)間:2020-12-29

摘要:生物堿水蘇堿是中藥 (TCM) 中所用的 50 種基本草藥之一中國(guó)益母草 (Leonurus japonicus) 中的主要活性成分。水蘇堿的高極性意味著它在反相色譜分析中基本不會(huì)被保留,植物基質(zhì)中許多其他極性化合物的共洗脫也使水蘇堿的分析非常有挑戰(zhàn)性。親水相互作用色譜 (HILIC) 是分析極性化合物的一種簡(jiǎn)單、強(qiáng)大的解決方案。Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 色譜柱能夠直接從植物提取物中分離出水蘇堿并實(shí)現(xiàn)定量測(cè)定。該色譜柱結(jié)合了先進(jìn)的兩性離子固定相組成和表面多孔顆粒填料,可在低反壓操作條件下提供優(yōu)異的峰形和分離度。

 

前言使用 :Agilent Infinity Lab Poroshell 120, 2.7 µm HILIC-Z 從益母草 (Leonurus japonicus) 分離出水蘇堿。由于水蘇堿的紫外信號(hào)較弱,因此采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 (ELSD) 進(jìn)行檢測(cè)。同時(shí)開(kāi)發(fā)了等度和梯度兩種方法。

試劑與化學(xué)品所有試劑均為 HPLC 級(jí)或更高等級(jí)。HPLC 級(jí)乙腈購(gòu)自 J. T. Baker (Center Valley, PA, U.S.A.)。水經(jīng)由 EMD Millipore Milli-Q Integral 系統(tǒng) (Darmstadt, Germany) 純化。乙酸銨購(gòu)自 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)。鹽酸水蘇堿和益母草 (L. japonicus) 由上海詩(shī)丹德標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司(中國(guó)上海)提供。

 

儀器和材料 • Agilent InfinityLab 接頭 • 色譜柱前端:Quick Connect 快速連接接頭(部件號(hào) 5067-5965) • 色譜柱末端:Quick Turn 接頭(部件號(hào) 5067-5966) • Agilent Captiva 經(jīng)濟(jì)型過(guò)濾器,聚丙烯膜,直徑 13 mm,孔徑 0.2 µm(部件號(hào) 5190-5265) • 安捷倫樣品瓶,螺口,棕色,帶書(shū)寫(xiě)簽,經(jīng)認(rèn)證,2 mL, 100/包(部件號(hào) 5182-0716) • 安捷倫固定螺口蓋,帶 PTFE/紅色硅膠隔墊(部件號(hào) 5190-7024) • 安捷倫樣品瓶?jī)?nèi)插管,250 µL,去活玻璃,帶聚合物支腳(部件號(hào) 5181-8872) • Agilent InfinityLab 溶劑瓶,棕色,1000 mL(部件號(hào) 9301-6526) • Agilent InfinityLab Stay Safe 溶劑瓶安全蓋,GL45, 3 口,1 個(gè)放空閥(部件號(hào) 5043-1219) • Eppendorf 移液器和連續(xù)分液器 • 超聲儀 (VWR, Radnor, PA, USA) • 渦旋器和多管渦旋器 (VWR, Radnor, PA, USA)

 

儀器 • Agilent 1260 Infinity II 二元泵 (G7112B) • Agilent 1260 Infinity II 樣品瓶進(jìn)樣器 (G7129C) • Agilent 1260 Infinity II 高容量柱溫箱 (G7116A) • Agilent 1290 Infinity II ELSD (G7102A) • 超低擴(kuò)散工具包 (5067-5189) • Agilent OpenLAB 軟件樣品前處理將鹽酸水蘇堿標(biāo)準(zhǔn)品溶于 70% 乙醇中,制得濃度為 0.5 mg/mL 的標(biāo)樣,無(wú)需進(jìn)一步樣品前處理即可直接進(jìn)樣。植物提取物按照以下步驟進(jìn)行制備: 1. 稱(chēng)取 1 g 益母草 (L. japonicus) 干粉 2. 將 25 mL 70% 乙醇加入錐形瓶中,并對(duì)整個(gè)容器稱(chēng)重 3. 使溶液回流 2 小時(shí),冷卻后再次稱(chēng)重 4. 加入 70% 乙醇補(bǔ)充失去的重量 5. 搖勻,并通過(guò) 0.2 µm PTFE 膜針頭過(guò)濾器(部件號(hào) 5190- 5265)對(duì)提取物進(jìn)行過(guò)濾 6. 如有必要,用乙腈將提取物稀釋至所需濃度

 

 

結(jié)論:成功地從益母草 (L. japonicus) 中分離出水蘇堿。同時(shí)開(kāi)發(fā)了等度和梯度方法,這兩種方法均可使水蘇堿與共存于提取物中的極性和非極性化合物得到*分離。

 

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