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AB液質(zhì)聯(lián)用儀分析酸性農(nóng)藥的實(shí)驗(yàn)方法（負(fù)離子模式）
閱讀：2237 發(fā)布時間：2020-1-8色譜流動相的制備： 1M甲酸銨溶液：稱取63g甲酸銨，溶于1L HPLC級的水中。 流動相A：在1L水(HPLC級) 中加入5mL 1M甲酸銨溶液。 流動相B：在1L甲醇(HPLC級) 中加入5mL 1M甲酸銨溶液。
樣品制備（水果與蔬菜基質(zhì)） 基于Anastassiadies等人提出的方法[1] ：
1. 稱量10g切碎的樣品；
2. 加入100µL 內(nèi)標(biāo)溶液(D5-Atrazine 1µg/mL)；
3. 加入10mL乙腈，劇烈振搖；
4. 加入4g無水MgSO4和1g的NaCl；
5. 馬上渦旋混合，以防止MgSO4共聚物的生成；
6. 振搖30s后，4300r/min離心5min；
7. 取出1mL初提液，轉(zhuǎn)移至含有150mg無水MgSO4的離心管中；
8. 混合，5200r/min 離心1min；
9. 取出500µL上清液，用水稀釋到1mL，得到提取液濃度約為0.5g/mL。
基于Klein and Alder等人提出的方法[2, 3] ：
1. 在5g或10g樣品中，加入水到10mL；
2. 加20mL甲醇，使用 UltraTurrax 組織勻漿機(jī)勻漿2min；
3. 有時需要過濾或離心；
4. 加入NaCl溶液 (100mL水中含20g NaCl)，每6mL加入NaCl溶液2mL；
5. 用5mL樣品溶液浸泡ChemElut柱；
6. 5min后，用16mL二氯甲烷洗脫；
7. 40℃揮發(fā)至干；
8. 用甲醇與水的混合溶液1.25mL (甲醇0.25mL，水1mL) 重新溶解；
9. 用0.45µm濾膜過濾。
基于Lehotay et al. [4] 提出的方法：
1. 使用Molinex 混合器或類似設(shè)備勻質(zhì)水果或蔬菜樣品；
2. 加入乙腈，(15.0 ± 0.05)g 勻質(zhì)的樣品加乙腈15mL，超聲波提取2min后，混旋5min；
3. 加入6g 無水MgSO4和1.5g NaCl的混合物，劇烈振搖1min；
4. 3000r/min 離心5min；
5. 取5mL上層溶液，加入1.8g 無水MgSO4和0.3g Bondesil C8 吸附劑；
6. 振搖20s；
7. 使用Eppendorf 5301型濃縮儀，或類似設(shè)備揮發(fā)至干；
8. 用乙腈/水＝1/9的溶液1mL重新溶解樣品；
9. 12000r/min高速離心2min；
10. 上清液轉(zhuǎn)入自動進(jìn)樣器的進(jìn)樣瓶中備用。
樣品制備(糧食) [5]
1.稱取10 g試樣(精確至0.01 g)與10 g硅藻土混合，移入加速溶劑萃取儀的34mL萃取池中，在10.34MPa 壓力、80℃條件下，加熱5min，靜態(tài)萃取3min，循環(huán)兩次，然后用池體積60%的乙睛(20.4mL)沖洗萃取 池，并用氮?dú)獯祾?00 s。萃取完畢后，將萃取液混勻，對含油量較小的樣品取萃取液體積的1/2(相當(dāng)于5 g 試樣量)，對含油量較大的樣品取萃取液體積的1/4(相當(dāng)于2.5g試樣量)，待凈化。
2.對A,B,C,D組農(nóng)藥:將Envi-18柱放入固定架上，加樣前先用10mL乙睛預(yù)洗柱，下接梨形瓶，移入上述 萃取液，并用15mL乙睛洗脫，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上將洗脫液濃縮至約1mL，備用。
3.對E組農(nóng)藥:將上述萃取液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至約1mL，將Sep-Pak Alumina N柱放入下接梨形瓶 的固定架上，加樣前先用20 mL乙睛預(yù)洗柱，將樣品濃縮液轉(zhuǎn)移至凈化柱上，再用3×10mL乙睛洗滌樣液 瓶，并將洗滌液移入柱中，將洗脫液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至約1mL，備用。
4.在Envi-Carb柱中加入約2 cm高無水硫酸鈉，將該柱連接在Sep-Pak氨基柱頂部，并將串聯(lián)柱放入下 接梨形瓶的固定架上。加樣前先用4mL乙睛+甲苯( 3+1 )預(yù)洗柱，當(dāng)液面到達(dá)硫酸鈉的頂部時，迅速將樣 品濃縮液轉(zhuǎn)移至凈化柱上，再用3×2mL乙睛+甲苯(3+1)洗滌樣液瓶，并將洗滌液移入柱中。在串聯(lián)柱上 加上50 mL貯液器，用25 mL乙睛+甲苯(3+1)洗脫農(nóng)藥，收集于梨形瓶中，并在40 ℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至 約0.5 mL。對A,B,C,D組農(nóng)藥，加入2×5mL正己烷進(jìn)行溶劑交換兩次，后使樣液體積約為1mL，將濃縮 液置于氮?dú)獯蹈蓛x上吹干，并迅速用乙睛+水(3+2)定容1mL，混勻，用于液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜測定。
色譜分離條件 Agilent 1100 系統(tǒng)：G1312A二元泵系統(tǒng)、G1367A型自動進(jìn)樣器、柱溫箱。 色譜柱：Phenomenex Synergi Fusion-RP反相柱，50mm×2mm，粒徑 4µm。流動相：A相—水 + 5mM 甲酸銨；B相—甲醇 + 5mM 甲酸銨。
MS/MS檢測：API 3200™或3200 QTRAP® LC-MS/MS液質(zhì)分析系統(tǒng)；TurboIonSpray ® 離子源，負(fù)離子模式，MRM掃描 方式。
