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在藥物研發(fā)和生命科學(xué)研究中，蛋白激酶作為細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的核心調(diào)控元件，在多種病理生理過程中扮演關(guān)鍵角色。據(jù)統(tǒng)計(jì)，人類基因組編碼的518種蛋白激酶中，約有30%與腫瘤、自身免疫病和代謝性疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。目前，全球激酶抑制劑市場規(guī)模已突破750億美元，并保持10%以上的年增長率，成為腫瘤和自身免疫疾病治療的核心領(lǐng)域。
激酶異常活化的病理機(jī)制
01信號轉(zhuǎn)導(dǎo)失調(diào)
正常生理狀態(tài)下，激酶通過精確的磷酸化調(diào)控維持細(xì)胞功能平衡。而在疾病狀態(tài)下，激酶活性異常（過度活化或抑制不足）會導(dǎo)致下游信號通路紊亂，驅(qū)動細(xì)胞增殖、炎癥反應(yīng)或代謝異常等病理過程。
02多通路交叉調(diào)控
激酶網(wǎng)絡(luò)具有高度的復(fù)雜性和冗余性，常形成正反饋循環(huán)和代償機(jī)制。例如：
• MAPK通路異常與腫瘤發(fā)生發(fā)展
• JAK-STAT通路過度活化與自身免疫病
• PI3K-AKT-mTOR通路失調(diào)與代謝性疾病
典型激酶相關(guān)疾病及治療靶點(diǎn)
Revvity激酶研究解決方案
傳統(tǒng)激酶活性檢測方法（放射性檢測、ELISA等）存在操作繁瑣、通量受限等問題，而ADP-Glo方法需要自行尋找活性底物，且是間接檢測酶活。Revvity基于HTRF/LANCE均相檢測平臺，提供激酶研究解決方案，可為研究者提供高效、快速的激酶抑制劑篩選方法。
01Kinase活性檢測試劑盒
適用于功能性激酶抑制的篩選，通過直接檢測底物磷酸化水平的變化，定量分析化合物對激酶催化活性的抑制能力。
02Kinase結(jié)合檢測試劑盒
適用于激酶結(jié)合劑的篩選，通過競爭性結(jié)合實(shí)驗(yàn)檢測化合物與激酶活性位點(diǎn)或變構(gòu)位點(diǎn)的親和力。
Kinase檢測技術(shù)具有以下優(yōu)勢：
• 高靈敏度：可檢測pM級激酶活性變化
• 生理相關(guān)性：保持天然構(gòu)象的激酶-底物相互作用
• 高通量：適合大規(guī)?；衔锖Y選，檢測僅需2小時(shí)
• 高兼容性：試劑盒配備的通用型底物兼容200+激酶
HTRF技術(shù)原理與應(yīng)用實(shí)例
KinEASE活性檢測試劑盒
檢測原理
KinEASE激酶活性檢測試劑盒基于均相時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移(HTRF)技術(shù)，采用通用型生物素化絲氨酸/蘇氨酸激酶（STK）或者酪氨酸（TK）底物與鏈霉親和素-XL665（SA-XL665）受體結(jié)合，當(dāng)激酶催化底物磷酸化后，供體銪穴狀化合物（Eu3?-cryptate）標(biāo)記的磷酸化特異性抗體可識別并結(jié)合磷酸化位點(diǎn)，形成"供體-底物-受體"三元復(fù)合物；在320/340nm激發(fā)光作用下，供體產(chǎn)生的620nm發(fā)射光通過能量轉(zhuǎn)移激發(fā)受體發(fā)出665nm特征信號，該信號由酶標(biāo)儀檢測并定量分析激酶活性。
圖1. HTRF KinEASE活性檢測原理
操作流程
步驟1：反應(yīng)啟動
將待測化合物（或?qū)φ站彌_液）與激酶、底物混合，加入ATP啟動磷酸化反應(yīng)。
步驟2：檢測體系構(gòu)建
反應(yīng)孵育適當(dāng)時(shí)間后，加入銪（Eu）標(biāo)記的磷酸化抗體及SA-XL665受體，形成檢測復(fù)合物。
步驟3：信號檢測
繼續(xù)孵育1小時(shí)后，使用酶標(biāo)儀讀取信號（激發(fā)波長320/340 nm，檢測發(fā)射波長620 nm和665 nm）。
圖2. HTRF KinEASE 活性檢測步驟
驗(yàn)證數(shù)據(jù)
HTRF KinEASE試劑盒已完成200余種絲氨酸/蘇氨酸激酶及酪氨酸激酶的活性檢測驗(yàn)證。同時(shí)，我們也提供LANCE® Ultra激酶檢測平臺作為選擇
酶濃度梯度滴定曲線與時(shí)間動力學(xué)特征
廣譜抑制劑星形孢菌素（Staurosporine）劑量依賴性抑制效應(yīng)
激酶結(jié)合檢測試劑盒
檢測原理
Revvity KinEASE結(jié)合檢測試劑盒采用HTRF競爭法檢測原理，通過Eu3?-cryptate標(biāo)記的GST/6His/生物素抗體捕獲相應(yīng)標(biāo)記的激酶，當(dāng)激酶與熒光標(biāo)記的ATP競爭性抑制劑示蹤劑（Staurosporine、Dasatinib或Sunitinib）結(jié)合時(shí)，HTRF信號比（665nm/620nm）隨示蹤劑結(jié)合增加而升高；待測化合物通過競爭性結(jié)合激酶ATP位點(diǎn)取代熒光示蹤劑，導(dǎo)致FRET信號減弱，從而實(shí)現(xiàn)對激酶抑制劑的快速篩選和親和力評估。
圖3. HTRF Kinase Binding檢測原理
操作流程
步驟1：復(fù)合物形成
將Eu3?-cryptate標(biāo)記的抗體（抗GST/6His/生物素）與標(biāo)簽激酶孵育，使其特異性結(jié)合；同時(shí)加入熒光示蹤劑（Staurosporine/Dasatinib/Sunitinib-XL665）和待測化合物，兩者競爭性結(jié)合激酶的結(jié)合位點(diǎn)
步驟2：信號檢測
繼續(xù)孵育1小時(shí)后，使用酶標(biāo)儀讀取信號（激發(fā)波長320/340 nm，檢測發(fā)射波長620 nm和665 nm）。
圖4. HTRF Kinase Binding檢測步驟
驗(yàn)證數(shù)據(jù)
d2熒光受體標(biāo)記的紅色示蹤劑示蹤劑滴定曲線
幾種激酶結(jié)合劑的劑量依賴性抑制曲線
產(chǎn)品列表
