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構建穩定細胞株是生物制藥領域CMC流程中的核心步驟，通過精心策劃的實驗設計篩選出高效且穩定表達目標蛋白的細胞株，從而為后續的生物制品的產量和質量奠定基礎。
在構建穩定細胞株過程中，以下的關鍵環節需嚴格遵循以確保高效與穩定：
1.載體策略與設計：在載體設計階段，需精心選擇啟動子、增強子等調控元件，以精確控制目的基因的表達水平。
2. 轉染方法與優化：根據目標細胞類型及實驗需求，選擇合適的轉染方法，如電轉、脂質體介導、病毒介導等。
3.高通量篩選與克隆鑒定：利用高通量篩選技術和先進的檢測方法，如單細胞打印機，對轉染后的細胞進行快速篩選，挑選出表達水平高且穩定的細胞克隆。
4.表達穩定性監測：在細胞株構建完成后，需定期檢測目標基因的表達情況，包括表達水平、時空分布等。通過長期跟蹤監測，確保細胞株的遺傳穩定性和表達穩定性，以滿足后續實驗與應用的需求。
單克隆篩選是細胞系開發中的關鍵步驟，旨在從混合細胞群體中分離出單個細胞，并使其增殖形成遺傳背景均一的細胞克隆。以下是一些常見的單克隆篩選方法：有限稀釋法，半固體培養基挑選法，以及流式細胞術挑選法等。
有限稀釋法和流式熒光激活細胞分選（FACS）很常見，但在效率、選擇控制和細胞活力等方面都不理想。有限稀釋法雖然經濟，可能比FACS分選對細胞造成損傷小，但耗時耗力，可能還會有些人為因素的影響。
流式分選雖然對單細胞有良好控制且通量高，但分選時產生的高剪切力和持續靜電，會對敏感或部分受損細胞（如電轉）的存活率/克隆效率有很大不良影響。
單細胞打印技術它以一種非常溫和、低成本和高度可控技術，適合從0-40μm的各種特異性細胞克隆應用。通過噴墨式打印技術將單個細胞非接觸式的分離到標準的96/384孔板中，實現高通量工作流程。特別適用于工程細胞的克隆，在維持細胞原有生命活力的同時，還為單細胞克隆性提供了直接的證據（提供每個打印細胞的可靠記錄），可根據細胞直徑、圓度和熒光強度進行分選，并且可以整合到其它單細胞分析管路上，與各種下游流程的兼容性。
德國 Cytena 公司開發的單細胞分離篩選系統 UP.SIGHT 2.0，通過自動化方式替代勞動密集和耗時的步驟來簡化細胞系開發的工作流程。將具有高效、快速和溫和的單細胞分選技術與超快速、高質量的成像系統相結合，可實現噴嘴成像和3D全孔成像，從而通過獨立的光學設備雙重保證單克隆性
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