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單細胞鋪板的常見問題解答
閱讀：502 發(fā)布時間：2022-12-16
單細胞鋪板是細胞實驗中常見又必須掌握的一門技術(shù)，看起來是非常簡單的一項操作，但其實卻經(jīng)常會遇到：細胞分布不均勻的情況。要知道把用于實驗的細胞鋪的均勻且密度適宜，不僅看起來賞心悅目，更是決定了我們實驗的穩(wěn)定性。
單細胞鋪板的常見問題解答：
1、細胞計數(shù)前后出現(xiàn)較大誤差？
考慮細胞沉降導(dǎo)致懸液不勻；懸液體積過大或過??；稀釋倍數(shù)太高或太低等原因造成。
2、如何克服細胞懸液不均勻的問題？
盡量將細胞吹打為單個，防止抱團，且用移液槍充分吹打，使其均勻懸浮在培養(yǎng)基中。
3、一般加多少細胞懸液合適？
由于加入計數(shù)室的量，過少會導(dǎo)致計數(shù)室內(nèi)出現(xiàn)氣泡，過多則會使得計數(shù)板上的蓋玻片不緊貼計數(shù)板，使得高度變高，體積變大；計數(shù)室體積為9mm3，所以一般加15ul左右。
4、計數(shù)時，細胞稀釋倍數(shù)如何控制？
若是計數(shù)室細胞過稀或過密，會造成較大誤差，一般適濃度為5～10×105細胞/ml。如一般10cm皿的細胞約300-500萬個，一些細胞個體小也能達到1000-2000萬，可根據(jù)所需細胞數(shù)目取出部分作稀釋或連續(xù)稀釋后計數(shù)。舉例來說可將100ul細胞懸液加入到900ul培養(yǎng)基中，混勻后進行計數(shù)，計數(shù)所得乘以10即為實際細胞密度。
5、計數(shù)的原則有哪些？
計數(shù)時對壓在外圈邊線的細胞遵循“計上不計下，計左不計右”的統(tǒng)計學(xué)原則，遇到兩個以上的細胞組成的細胞團計為一個細胞
6、對于某些容易聚團的細胞，該怎么辦？
對于容易聚團的細胞，盡管當(dāng)時搖勻了，但是靜置30min后，取出后將細胞培養(yǎng)板后，肉眼即可見嚴重的細胞居中抱團現(xiàn)象，比如乳腺癌細胞MDA-MB-231。
對于這種細胞解決辦法：從個人經(jīng)驗來看，若是時間允許的話，可以降低接種密度，可以隔一天細胞多了再進行藥物處理或者劃線等。
7、如何避免每個孔之間的細胞不均勻？
單細胞鋪板速度盡量快點，在加完半邊板后，需要再次將培養(yǎng)皿內(nèi)剩余的細胞懸液充分混勻再繼續(xù)鋪板。