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這樣進(jìn)行單細(xì)胞分離實(shí)際操作更有效
閱讀：268 發(fā)布時(shí)間：2022-9-8
目前，單細(xì)胞多組學(xué)分析正在如火如荼地進(jìn)行著，在各大雜志上發(fā)表了一些重磅的研究成果。也許你也很想嘗試一下，但是在那之前，你需要把單細(xì)胞分離出來。理想狀態(tài)下的單細(xì)胞分離速度快、效率高，而實(shí)際操作可能效率低、時(shí)間長。從異質(zhì)細(xì)胞群體中分離單細(xì)胞主要有人工分離、熒光激活細(xì)胞分選和微流控技術(shù)三種方法。當(dāng)然，除了成熟的方法外，還不斷涌現(xiàn)出新的精確度和特異度分離的新方法。
如果您想要的細(xì)胞在懸浮狀態(tài)中含量相對(duì)較高，流式分選是您理想的選擇。如果樣本為實(shí)體組織，則可將膠原蛋白及其它細(xì)胞外蛋白質(zhì)分解。但是酶消化對(duì)細(xì)胞的影響很大，甚至可能改變基因的轉(zhuǎn)錄狀態(tài)。將組織細(xì)胞制成懸液后，利用熒光標(biāo)記進(jìn)行細(xì)胞分離。再進(jìn)一步獲得單細(xì)胞就比較困難了，可能需要借助微流體設(shè)備。
1.為了保持細(xì)胞活力，縮短單細(xì)胞懸液制備時(shí)間
2.考慮使用細(xì)胞篩過濾細(xì)胞團(tuán)塊或雙細(xì)胞。
3.注意選擇包括分選和收集溶液的緩沖液。
4.如果您打算在分選后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，則使用對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，并確定最佳培養(yǎng)條件。
5.轉(zhuǎn)染細(xì)胞的分選通常在轉(zhuǎn)染后72小時(shí)進(jìn)行，以便提高細(xì)胞群的存活率
6.如果用熒光抗體分離稀有細(xì)胞，染色前應(yīng)將抗體離心，以除去任何熒光顆粒，這些熒光顆?？赡軙?huì)被誤認(rèn)為是靶細(xì)胞。
7.就單細(xì)胞基因組應(yīng)用而言，不要忘記在分選之后將平板離心，以確保細(xì)胞位于孔底。
8.選擇用于評(píng)估分選細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量的可靠分析技術(shù)。