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單細(xì)胞鋪板的有關(guān)經(jīng)驗(yàn)，來一起了解一下吧
閱讀：1334 發(fā)布時(shí)間：2021-11-20
單細(xì)胞鋪板大概是我們常見的一個(gè)實(shí)驗(yàn)?，F(xiàn)在我們常用的方法就是手動(dòng)的有限稀釋，但有時(shí)候鋪得不是很均勻：要么中間密周圍稀，要么周圍密中間禿頂。為了做好手動(dòng)的有限稀釋單細(xì)胞鋪板，我們需要注意以下事項(xiàng)：
盡量消化細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液。對于易于消化的細(xì)胞，我一般DPBS清洗一遍，加0.5ml胰酶潤洗一遍（25cm2培養(yǎng)瓶或6孔板），棄掉胰酶，37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右，鏡下觀察是否細(xì)胞消化較為分散。如果不夠，延長消化時(shí)間。
96孔板一般以100微升每孔接種，直接用100微升移液器吸取細(xì)胞懸液，沿孔壁（稍離開一點(diǎn)孔底即可，不要離底太高）直接接入，移液器不需*打到，輕輕按下即可，每鋪完一行換一次槍頭同時(shí)輕輕混勻細(xì)胞懸液。都加完后蓋上蓋子，左手輕輕扶住板的左邊，右手輕輕敲擊板的右邊緣，注意把握力度（我一般輕巧敲三下），太強(qiáng)或次數(shù)太多會導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆，將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)（逆時(shí)針效果不好），依次敲擊剩余三個(gè)邊，靜置約5分鐘，放入37度培養(yǎng)箱。
6孔板、12孔板或24孔板，可采用將每個(gè)孔加入少量無血清培養(yǎng)基，晃動(dòng)浸潤整個(gè)孔底，然后用移液槍吸至第二孔，同樣方法浸潤孔底，其它孔依此類推，這樣整個(gè)孔底都是濕潤的，細(xì)胞懸液會平鋪在整個(gè)孔底，注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺靜置一下。這個(gè)方法就是有點(diǎn)慢，但操作熟練了也不慢。也可以采用輕拍的方式，但力度沒有96孔板好掌握，效果沒有96孔板好。
培養(yǎng)瓶里面加好細(xì)胞以后(比如傳代好/分好細(xì)胞以后)，先順時(shí)針搖晃3次，馬上逆時(shí)針搖晃3次。然后延X軸Y軸分別水平搖動(dòng)3次。放入CO2培養(yǎng)箱后,平放著培養(yǎng)瓶重復(fù)延X軸Y軸分別水平搖動(dòng)3次。
看來為了做好單細(xì)胞分離，手動(dòng)有限稀釋難度還是挺大的。
Namocell單細(xì)胞分離儀能快速、高效、輕柔地完成96孔板的單細(xì)胞鋪板工作，將制備好的單細(xì)胞懸液加入到儀器，一分鐘左右就能鋪完1塊96孔板，并且整版單細(xì)胞的效率能達(dá)到90%左右。
以上就是單細(xì)胞鋪板的有關(guān)經(jīng)驗(yàn)，希望對您有所幫助