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單克隆培養(yǎng)的原理介紹
閱讀：2936 發(fā)布時間：2020-7-20
單克隆培養(yǎng)對增殖力比較強的細胞操作起來的確比較適合，但增殖較慢的細胞也不是不可以，至于稀釋到每孔只有1~2細胞，細胞稀釋的密度要取決你每孔所加的培養(yǎng)液體積，一般說來保證每孔內(nèi)平均細胞數(shù)為0.5個即可，稀釋并加入培養(yǎng)孔后，在顯微鏡下觀察，將只有一個細胞的孔標記出。
經(jīng)過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養(yǎng)，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體，克隆的時間一般說來越早越好，因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養(yǎng)和空間，而產(chǎn)生抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能，但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩(wěn)定，數(shù)量少也易丟失。克隆化的陽性雜交瘤細胞，經(jīng)過一段時期培養(yǎng)之后，也還會因為細胞突變或特定染色體的丟失，使部分細胞喪失產(chǎn)生抗體的能力，所以需要再次或多次克隆化培養(yǎng)。
單克隆培養(yǎng)原理：將細胞經(jīng)熒光抗體染色后，經(jīng)噴嘴形成單個細胞的線形液滴，熒光素發(fā)射熒光，此信號由光電倍增管接收，再結(jié)合細胞形態(tài)大小產(chǎn)生光散射信號，經(jīng)電腦處理，產(chǎn)生信號并與預(yù)定的信號對比，根據(jù)細胞熒光強度及細胞大小不同，將細胞分成不同級別，在電場中發(fā)生偏離，而分別收集于不同容器中。