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了解一下什么是單細(xì)胞全轉(zhuǎn)錄組吧

閱讀:285        發(fā)布時(shí)間:2019-12-11
   單細(xì)胞全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)是在單細(xì)胞水平對(duì)全轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行擴(kuò)增與測(cè)序的一項(xiàng)新技術(shù)。MALBAC(Multiple Annealing and Looping Based Amplification Cycles,簡(jiǎn)稱MALBAC),即多次退火環(huán)狀循環(huán)擴(kuò)增技術(shù)是該領(lǐng)域的先進(jìn)技術(shù),相關(guān)文章發(fā)表于《科學(xué)》(Science)。

  單細(xì)胞全轉(zhuǎn)錄組技術(shù)是在單細(xì)胞水平對(duì)全轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行擴(kuò)增與測(cè)序的一項(xiàng)新技術(shù)。其原理是將分離的單個(gè)細(xì)胞的微量全轉(zhuǎn)錄組RNA進(jìn)行擴(kuò)增后進(jìn)行高通量測(cè)序。

  對(duì)單個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組的分析由Brady等和Eberwine等分別利用基于PCR技術(shù)的對(duì)單個(gè)細(xì)胞cDNA的指數(shù)擴(kuò)增和基于T7RNA連接酶體外轉(zhuǎn)錄(invitrotranscription)的線性擴(kuò)增進(jìn)行了初步的探索。2006年,Kurimoto等改進(jìn)了單細(xì)胞cDNA擴(kuò)增方法,將定向的PCR擴(kuò)增與線性擴(kuò)增相結(jié)合,對(duì)單個(gè)ESC進(jìn)行了單細(xì)胞cDNAmicroarray分析,在高覆蓋率和準(zhǔn)確性的前提下,使基因表達(dá)的代表性和再現(xiàn)性都有了明顯的提高。而隨著測(cè)序技術(shù)的發(fā)展,Tang等將單細(xì)胞cDNA擴(kuò)增技術(shù)和新一代測(cè)序技術(shù)相結(jié)合而*創(chuàng)立的單細(xì)胞RNA測(cè)序分析應(yīng)用于單個(gè)小鼠的卵裂球,終發(fā)現(xiàn)了芯片未檢測(cè)到的5200多個(gè)基因和1800個(gè)可變剪切點(diǎn)。

  相比而言,單細(xì)胞cDNAmicroarray分析技術(shù)成熟,成本低廉,尤其適用于分析已知基因上調(diào)或下調(diào)的一般轉(zhuǎn)錄信息,但是該系統(tǒng)相對(duì)比較封閉,對(duì)于未知基因的檢測(cè)無(wú)能為力,并且不能提供mRNA的確切長(zhǎng)度和序列;

  而單細(xì)胞RNA測(cè)序則是一個(gè)開(kāi)放的系統(tǒng),能夠提供更加詳細(xì)和準(zhǔn)確的轉(zhuǎn)錄信息,尤其可對(duì)未知基因的轉(zhuǎn)錄進(jìn)行檢測(cè),但是該方法價(jià)格昂貴,并且對(duì)于結(jié)果的分析需要強(qiáng)大的計(jì)算機(jī)系統(tǒng)提供保障。

  哈佛大學(xué)謝曉亮院士推出基于MALBAC技術(shù)的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組擴(kuò)增技術(shù),可以對(duì)單個(gè)細(xì)胞、單條染色體或者0.5皮克的RNA進(jìn)行高保真擴(kuò)增,并且已經(jīng)進(jìn)行了商業(yè)化運(yùn)作。

  發(fā)展的單分子測(cè)序技術(shù)無(wú)需逆轉(zhuǎn)錄酶和擴(kuò)增步驟,但測(cè)序錯(cuò)誤率高。我們相信隨著技術(shù)發(fā)展這些局限性會(huì)逐步優(yōu)化和改進(jìn)。

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