在使用單細胞鋪板可能會出現(xiàn)的問題
首先,了解一下單細胞鋪板的必要性!
從經(jīng)濟和的角度來說,需要根據(jù)實驗?zāi)康倪x擇不同規(guī)格的培養(yǎng)板。如在進行藥物對待測細胞半抑制率(IC50)測試時,通常使用96孔板,一方面可以設(shè)置濃度梯度;另外還可一次性測多個藥物,減少實驗誤差。
下面我們再來了解一下單細胞鋪板可能會出現(xiàn)的問題
1、細胞計數(shù)前后出現(xiàn)較大誤差?
考慮細胞沉降導(dǎo)致懸液不勻;懸液體積過大或過小;稀釋倍數(shù)太高或太低等原因造成。
2、如何克服細胞懸液不均勻的問題?
盡量將細胞吹打為單個,防止抱團,且用移液槍充分吹打,使其均勻懸浮在培養(yǎng)基中。
3、一般加多少細胞懸液合適?
由于加入計數(shù)室的量,過少會導(dǎo)致計數(shù)室內(nèi)出現(xiàn)氣泡,過多則會使得計數(shù)板上的蓋玻片不緊貼計數(shù)板,使得高度變高,體積變大;計數(shù)室體積為9mm3,所以一般加15ul左右。
4、計數(shù)時,細胞稀釋倍數(shù)如何控制?
若是計數(shù)室細胞過稀或過密,會造成較大誤差,一般適濃度為5~10×105細胞/ml。如一般10cm皿的細胞約300-500萬個,一些細胞個體小也能達到1000-2000萬,可根據(jù)所需細胞數(shù)目取出部分作稀釋或連續(xù)稀釋后計數(shù)。舉例來說可將100ul細胞懸液加入到900ul培養(yǎng)基中,混勻后進行計數(shù),計數(shù)所得乘以10即為實際細胞密度。
5、計數(shù)的原則有哪些?
計數(shù)時對壓在外圈邊線的細胞遵循“計上不計下,計左不計右”的統(tǒng)計學(xué)原則,遇到兩個以上的細胞組成的細胞團計為一個細胞。