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光度計工作原理
導讀：
分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成。
光度計特點：
1.采用微機控制并進行數(shù)據(jù)處理。
2.用干涉濾光片作為分光元件，光電管進行光電轉(zhuǎn)換。
3.具有鉀、鈉濃度直讀，曲線擬合，靈敏度漂移，自動校正，自動調(diào)滿度。火焰能量指示，操作失誤顯示，打印結(jié)果等功能。
4.線性穩(wěn)定性、重現(xiàn)性好，尤其適合臨床應(yīng)用。
分光光度計就是利用分光光度法對物質(zhì)進行定量定性分析的儀器。
而分光光度法則是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對該物質(zhì)進行定性和定量分析。 常用的波長范圍為：(1)200～400nm的紫外光區(qū),(2)400～760nm的可見光區(qū),(3)2.5～25μm（按波數(shù)計為4000cm<-1>～400cm<-1>）的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計（或比色計）、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度，所有儀器應(yīng)按照國家計量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定，定期進行校正檢定。 單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比，其關(guān)系如下式：
A=-log(I/I。)=-lgT=kLc
式中 :A 為吸收度；
I。為入射的單色光強度；
I 為透射的單色光強度；
T 為物質(zhì)的透射比；
k 為吸收系數(shù)；
L 為被分析物質(zhì)的光程
c 為物質(zhì)的濃度
物質(zhì)對光的選擇性吸收波長，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后,可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見光區(qū)，除某些物質(zhì)對光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒有吸收,但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時應(yīng)用標準品或?qū)φ掌吠瑫r操作。
