 |
上海吉至生化科技有限公司
主營產(chǎn)品： 潮霉素b,DTT二硫蘇糖醇,Albumin BovineⅤ 牛血清白蛋白Ⅴ,Zeocin 博萊霉素 1.25ml -20℃ （125mg）,IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 進口 100g |
8
聯(lián)系電話
|
上海吉至生化科技有限公司
主營產(chǎn)品： 潮霉素b,DTT二硫蘇糖醇,Albumin BovineⅤ 牛血清白蛋白Ⅴ,Zeocin 博萊霉素 1.25ml -20℃ （125mg）,IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 進口 100g |
聯(lián)系電話
2023-12-19 閱讀(1133)
臺盼藍染液是細胞活性染料，常用于檢測細胞膜的完整性。細胞損傷或死亡時，臺盼藍可穿透變性的細胞膜，與解體的DNA結(jié)合，使其著色。而活細胞能阻止染料進入細胞內(nèi)。故可以檢測細胞是否存活。
臺盼藍染色法的原理
正常的活細胞，胞膜結(jié)構(gòu)完整，能夠排斥臺盼藍，使之不能夠進入胞內(nèi)；而喪失活性或細胞膜不完整的細胞，胞膜的通透性增加，可被臺盼藍染成藍色。通常認(rèn)為細胞膜完整性喪失，即可認(rèn)為細胞已經(jīng)死亡，這與中性紅作用相反。
因此，借助臺盼藍染色可以非常簡便、快速地區(qū)分活細胞和死細胞。臺盼藍是組織和細胞培養(yǎng)中常用的死細胞鑒定染色方法之一。
注意凋亡小體也有臺盼藍拒染現(xiàn)象。臺盼藍染色后，通過顯微鏡下直接計數(shù)或顯微鏡下拍照后計數(shù)，就可以對細胞存活率進行比較精確的定量。
實驗步驟：
1. 用Hanks液配制0.1%臺盼藍溶液；
2. 用0.5%胰蛋白酶：0.2%EDTA=1：1混合液來消化培養(yǎng)的貼壁細胞；
3. 再加入適量Hanks液制成細胞懸液；
4. 將待染色細胞稀釋至所需濃度（方法及濃度范圍與細胞計數(shù)相同）；
5. 每0.1ml細胞懸液約加新鮮配制的染液一小滴，室溫下染3—5min；
6. 染色過的細胞材料，取一滴細胞懸液置玻片上，加蓋玻片后放高倍鏡下觀察；
7. 死亡的細胞著淺藍色并膨大，無光澤。活細胞不著色并保持正常形態(tài)，有光澤；
8. 計數(shù)1000個細胞中的活細胞和死細胞數(shù)目；
9. 統(tǒng)計未染色細胞?？砂垂接嬎愠黾毎盥省?/span>
細胞活率（%）=未染色的細胞數(shù)/觀察的細胞總數(shù)×100。
MTT染色原理，與臺盼藍染色原理有類似之處
活細胞中的某些物質(zhì)（線粒體中的琥珀酸脫氫酶）能夠和MTT反應(yīng)，使MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲瓚并沉積在細胞中，而死細胞沒有此功能。DMSO（二甲基亞砜）能夠?qū)⒋私Y(jié)晶（藍紫色甲瓚）溶解，在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm波長處測定其吸光值，能夠間接的反應(yīng)活細胞的數(shù)量。一定范圍內(nèi)，藍紫色結(jié)晶沉淀的數(shù)量與細胞數(shù)成正比。目前MTT法因其靈敏度高，經(jīng)濟快速等優(yōu)勢被廣泛的運用于細胞毒性試驗，腫瘤藥物的篩選、放射敏感性測定和對某些生物活性因子的活性檢測（原核真核蛋白表達）等方面。對細胞活力有影響的表達蛋白活性檢測可以通過MTT比色法進行。
