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鹽析法-多用于各種蛋白質(zhì)和酶的分離純化

2023-4-17 閱讀(984)

蛋白質(zhì)溶液中加入大量的中性鹽以破壞蛋白質(zhì)的膠體穩(wěn)定性而轉(zhuǎn)移析出,這種方法稱為鹽析。常用的中性鹽有硫酸銨,硫酸鈉,氯化鈉等。鹽析時(shí)所需的鹽濃度及pH值不同,故可用于對(duì)混和蛋白質(zhì)組分的分離。

例如用半飽和的硫酸銨來沉淀出血清中的球蛋白,飽和硫酸銨可以使血清中的白蛋白,球蛋白都沉淀出來,鹽析出沉淀的蛋白質(zhì),經(jīng)透析除鹽,仍保證蛋白質(zhì)的活性。調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)溶液的pH至等電點(diǎn)后,再用鹽析法則蛋白質(zhì)沉淀的效果更好。鹽析法分為兩類,第一類叫Ks分段鹽析法,在一定PH和溫度下通過改變離子強(qiáng)度實(shí)現(xiàn),用于早期的粗提液;第二種叫b分段鹽析法,在一定離子強(qiáng)度下通過改變PH和溫度來實(shí)現(xiàn),用于后續(xù)進(jìn)一步分離純化和結(jié)晶。影響鹽析的因素包括:蛋白質(zhì)濃度,離子強(qiáng)度和類型,PH值,溫度等。

針對(duì)溫度這一條,需要注意、在低離子強(qiáng)度或純水中,蛋白質(zhì)溶解度在一定范圍內(nèi)隨溫度增加而增加。但在高濃度下,蛋白質(zhì),酶和插入類物質(zhì)的溶解度隨溫度上升而下降。在一般情況下,蛋白質(zhì)對(duì)鹽析溫度無特殊要求,可在室溫下進(jìn)行,只有某些對(duì)溫度比較敏感的酶要求在0-4℃進(jìn)行。
使用硫酸銨沉淀蛋白需要注意:

硫酸銨中常含有少量的重金屬離子,對(duì)蛋白質(zhì)納米基有敏感作用,使用前必須用H2S處理:將硫酸銨配成濃溶液,通入H2S飽和,放置少量,用濾紙除去另外,高濃度的硫酸銨溶液一般呈酸性(PH = 5.0左右),使用前也需要用NH?·H?0 或硫酸調(diào)節(jié)至所需PH。




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