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堿性磷酸酶底物PNPP、BCIP/NBT的介紹

2021-11-2 閱讀(3001)

堿性磷酸酶是廣泛分布于人體肝臟、骨骼、腸、腎和胎盤等組織經(jīng)肝臟向膽外排出的一種酶,是免疫診斷試劑中常用的生物標(biāo)志物,也是重要的治療靶點(diǎn)。檢測(cè)堿性磷酸酶可用于肝臟功能異常,骨質(zhì)疏松和糖尿病等疾病的診斷。常見的堿性磷酸酶底物有PNPP、BCIP/NBT組合。

PNPP:中文名稱為對(duì)硝基苯磷酸二鈉,廣泛用作ELisa檢測(cè)堿性磷酸酶的底物。原理是,堿性溶液中無色的對(duì)硝基苯磷酸二鈉(PNPP)可被堿性磷酸酶催化分解出磷酸?;姿狨;c受體物結(jié)合,生成游離的對(duì)硝基苯酚,對(duì)硝基苯酚在堿性溶液中轉(zhuǎn)變?yōu)轷浇Y(jié)構(gòu),呈現(xiàn)較深的黃色,即水溶性黃色產(chǎn)物。在波長(zhǎng)405nm處檢測(cè)吸光度增高速率,則可檢測(cè)堿性磷酸酶。

對(duì)硝基苯磷酸二鈉(PNPP)還用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)、古文物膠原蛋白檢測(cè)等,也是醫(yī)藥、農(nóng)藥合成領(lǐng)域的重要化工中間體。 

BCIP/NBT:是堿性磷酸酶的發(fā)光底物組合,其原理是在堿性磷酸酯酶的催化下,BCIP會(huì)被水解產(chǎn)生強(qiáng)反應(yīng)性的產(chǎn)物,該產(chǎn)物會(huì)和NBT發(fā)生反應(yīng),形成不溶性的深藍(lán)色至藍(lán)紫色的產(chǎn)物,具有強(qiáng)特征性,易于捕捉分析,從而達(dá)到標(biāo)記作用。

BCIP,又稱對(duì)甲苯氨藍(lán),除作為堿性磷酸酶化學(xué)組織底物應(yīng)用于生化研究、醫(yī)藥領(lǐng)域外,還用于食品安全檢測(cè)中。 

NBT,即氯化硝基四氮唑藍(lán),在免疫印跡實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)堿性磷酸酶底物是其最常見的應(yīng)用。此外,氯化硝基四氮唑蘭(NBT)還作為脫氫酶和其它過氧化酶的底物,用于測(cè)定葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、乳酸脫氫酶、超氧化物歧化酶等。

 



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