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上海吉至生化科技有限公司

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ATP含量檢測(cè)試劑盒介紹

2021-9-8 閱讀(839)

 

ATP檢測(cè)試劑盒(ATP Assay Kit)可以用于檢測(cè)普通溶液、細(xì)胞或組織內(nèi)的ATP(adenosine 5'-triphosphate)水平。細(xì)胞和組織樣品一步裂解即可完成樣品制備,檢測(cè)靈敏度高達(dá)1nmol/L,化學(xué)發(fā)光可以持續(xù)穩(wěn)定達(dá)30分鐘,并且獲得的樣品還可以同時(shí)進(jìn)行Western檢測(cè)。
  ATP、作為最重要的能量分子在細(xì)胞的各種生理、病理過程中起著重要作用。ATP水平的改變、會(huì)影響細(xì)胞的功能,通常細(xì)胞在凋亡、壞死或處于一些毒性狀態(tài)下,ATP水平會(huì)下降,而高葡萄糖刺激等對(duì)于一些細(xì)胞可以上調(diào)細(xì)胞內(nèi)ATP水平。通常ATP水平的下降表明線粒體的功能受損或下降,在細(xì)胞凋亡時(shí)ATP水平的下降通常和線粒體的膜電位下降同時(shí)發(fā)生。
 樣品制備非常簡單。本試劑盒提供了可以用于細(xì)胞和組織裂解的ATP檢測(cè)裂解液,簡單裂解后即可用于ATP檢測(cè)。無需進(jìn)行高氯酸或(TCA)抽提,或樣品裂解后的煮沸等繁瑣操作。
 本試劑盒根據(jù)螢火蟲熒光素酶(firefly luciferase)催化熒光素產(chǎn)生熒光時(shí)需要ATP提供能量研制而成。 當(dāng)螢火蟲熒光素酶和熒光素都過量時(shí),在一定的濃度范圍內(nèi)熒光的產(chǎn)生和ATP的濃度成正比。這樣就可以高靈敏地檢測(cè)溶液中的ATP濃度。本試劑盒在樣品體積為100微升時(shí)可以檢測(cè)濃度低達(dá)1nmol/L的ATP。而常規(guī)的細(xì)胞或組織裂解液中ATP的濃度僅為0.1-1μmol/L,一些常見細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)ATP水平約為10nmol/mg蛋白。并且本試劑盒的檢測(cè)濃度范圍非常大,檢測(cè)上限可以高達(dá)10μmol/L,并在5nmol/L-10μmol/L范圍內(nèi)可以形成良好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
  本試劑盒進(jìn)行了特殊的優(yōu)化設(shè)計(jì),使檢測(cè)ATP時(shí)的化學(xué)發(fā)光非常穩(wěn)定。對(duì)于ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢測(cè)結(jié)果顯示,在開始反應(yīng)后10分鐘內(nèi)化學(xué)發(fā)光無明顯下降,開始反應(yīng)后30分鐘內(nèi)化學(xué)發(fā)光的下降不超過10%。
  使用本試劑盒中的ATP檢測(cè)裂解液裂解獲得的細(xì)胞或組織樣品,不僅可以用于ATP檢測(cè),還可用于檢測(cè)蛋白濃度、進(jìn)行SDS-PAGE或一些常規(guī)的較易溶解蛋白的Western檢測(cè)。

 



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