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血藍(lán)蛋白介紹及提取方法

2021-9-3 閱讀(663)

 

血藍(lán)蛋白是在某些軟體動(dòng)物、節(jié)肢動(dòng)物、血淋巴中發(fā)現(xiàn)的一種游離的藍(lán)色呼吸色素。血藍(lán)蛋白含兩個(gè)直接連接多肽鏈的銅離子,與含鐵的血紅蛋白類似,它易于氧結(jié)合,也易與氧解離,是已知的惟一可與氧可逆結(jié)合的銅蛋白,氧化時(shí)呈青綠色,還原時(shí)呈白色。
分子量450 000~1300 000。節(jié)肢動(dòng)物的血藍(lán)蛋白一條多肽鏈與一分子氧結(jié)合,含銅量0.17%;軟體動(dòng)物的血藍(lán)蛋白一條多肽鏈則與6分子氧結(jié)合,含銅量0.025%。銅以二價(jià)形式與蛋白直接結(jié)合。血藍(lán)蛋白有多種催化作用,特別是變性后,在特定條件下具有多酚氧化酶、過氧化氫酶和脂氧化酶等活性。
無脊椎動(dòng)物中,多數(shù)動(dòng)物的血液不含血紅蛋白,如軟體動(dòng)物(以及節(jié)肢動(dòng)物所含的是血藍(lán)蛋白(亦稱為血藍(lán)素)。
血藍(lán)蛋白是節(jié)肢動(dòng)物和軟體動(dòng)物血淋巴中的含銅呼吸蛋白,脫氧狀態(tài)為無色,結(jié)合氧狀態(tài)為藍(lán)色。分子質(zhì)量一般為50 ku~75 ku,由7個(gè)或8個(gè)功能單位組成圓柱形結(jié)構(gòu)。組成血藍(lán)蛋白的亞單位數(shù)目較多,每個(gè)亞單位都含有2個(gè)Cu(Ⅰ)離子。不同蛋白質(zhì)所含亞單位數(shù)目不同,有些血藍(lán)蛋白的分子質(zhì)量可達(dá)9×103 ku。軟體血藍(lán)蛋白是圓柱狀分子,含有10個(gè)~20個(gè)亞單位,每個(gè)亞單位(分子質(zhì)量為350 ku~450 ku)有7個(gè)~8個(gè)功能單元(氧分子結(jié)合部位)。節(jié)肢動(dòng)物血藍(lán)蛋白由六聚體或多個(gè)六聚體組成,分子質(zhì)量約為3.5×103 ku,每個(gè)亞單位(分子質(zhì)量為7.5 ku)含有一個(gè)氧合中心。血藍(lán)蛋白的主要生物學(xué)功能與機(jī)體內(nèi)的輸氧有關(guān),它與血紅蛋白和蚯蚓血紅蛋白并稱為動(dòng)物界中的3種呼吸蛋白。但近年的研究表明,血藍(lán)蛋白是一種多功能蛋白,它不僅具有輸氧功能,而且還與能量的貯存、滲透壓的維持及蛻皮過程的調(diào)節(jié)有關(guān)。特別引起學(xué)術(shù)界重視的是,血藍(lán)蛋白還具有酚氧化物酶活性和抗菌功能,被認(rèn)為是節(jié)肢動(dòng)物和軟體動(dòng)物中的一種重要的免疫分子。
從河蚌中提取,純化,以及冷凍干燥血藍(lán)蛋白的工藝。
1)河蚌樣本在45℃(±5℃)溫水中預(yù)處理,剝離甲殼;
2)注射器中加入抗凝劑,抽取心臟血;
3)血液透析后低溫離心,取上清,得到血藍(lán)蛋白粗提液
4)依次用凝膠過濾色譜、陰離子交換色譜層析得到高純度血藍(lán)蛋白原液
5)將血藍(lán)蛋白原液加入保護(hù)劑進(jìn)行凍干,制成凍干品。

 



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