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目录:上海贝博生物科技有限公司>>蛋白质生物学>>蛋白提取和裂解>> 植物高尔基体膜蛋白提取试剂盒

植物高尔基体膜蛋白提取试剂盒
  • 植物高尔基体膜蛋白提取试剂盒
参考价 面议
具体成交价以合同协议为准
参考价 面议
具体成交价以合同协议为准
  • 品牌 贝博生物
  • 型号
  • 厂商性质 生产商
  • 所在地
属性

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更新时间：2025-07-24 21:53:29浏览次数：181评价

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产品概述 product description 贝博® BBproExtra® 植物高尔基体膜蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种植物组织样本的高尔基体膜蛋白提取。提取过程简单方便，可在1小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。 本试剂盒含有的配方能够有效溶解膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存?？鞘褂煤?20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
植物
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
? 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
? 使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，但是蛋白回收率会下降。
? 提取液C在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
? 膜蛋白电泳时loading buffer应该避免煮沸。
? 膜蛋白电泳时可以提高loading buffer的SDS含量。
? 离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM，r/min）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。

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使用方法
1. 提取液准备：
每500 μl冷的蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取100-200 mg新鲜植物叶片组织样本，用PBS洗涤干净。
3. 用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
4. 加入1000 μl冷的试剂 A，置冰上10分钟。
5. 用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
6. 匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
7. 上清在4℃，3000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，将上清吸入另一预冷的干净离心管。
8. 将上清在4℃，6000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
9. 上清在4℃，50000×g力条件下离心20分钟。弃上清，留沉淀。
10. 在沉淀中加入500 μl冷的试剂B，混匀。
11. 在4℃，50000×g力条件下离心30分钟。弃上清，收集沉淀。
12. 在沉淀中加入400 μl蛋白提取液C，吹打混匀后，在4℃条件下振荡15-30分钟，至沉淀充分裂解，无明显沉淀。
13. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
14. 将上清吸入另一干净离心管，在37℃水?。ㄆ。?5分钟。
15. 在37℃， 1000×g离心5分钟。此时溶液分为2层，下层是膜蛋白约为30-50 μl。
16. 小心移除上层，留下下层大约40 μl液体。
17. 用50-100 μl膜蛋白溶解液D溶解下层，即可得到高尔基体膜蛋白样品。
18. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
膜蛋白丰度比较低，在条件允许的情况下，需要尽可能加大组织样本上样量以提高膜蛋白浓度。
减少膜蛋白溶解液用量。

2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

4.膜蛋白电泳没有条带？
膜蛋白样品通常浓度较低，电泳前一定要进行蛋白定量，以保证电泳是蛋白上样量足够。
膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超声处理一下，再进行蛋白定量。
蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸，采用50℃保温30分钟。
蛋白Loading buffer中SDS终浓度含量可以提高至3%-10%。
有些样品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上样缓冲液中，一般可以跑出清晰的蛋白条带。
电泳时采用低电压低电流电泳。
膜蛋白丰度通常较低，有条件可以尝试用银染染色。

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