使用注意事项
1、有许多因素影响抗体从膜洗脱,如膜类型、抗体类型和浓度及其与抗原结合特性。因此需要优化抗体去除液中孵育膜的时间。
2、确定膜上抗体是否去除与优化抗体去除液孵育膜的时间:用ECL工作液孵育再生后的膜约1分钟,然后进行X 光胶片曝光并显影,可确定膜上的抗体是否去除。如胶片上显示条带,表明抗体未去除,应继续将膜浸泡在抗体去除液中另外孵育30-60 分钟。然后再次ECL 检查膜上抗体是否去除。重复此步骤直到抗体去除并确定孵育时间。
3、使用脱脂奶粉封闭的膜要比使用BSA 封闭的膜上的抗体更容易被去除下来。因此准备进行再生的膜,应该使用脱脂奶粉而不是BSA 封闭。
4、尽量避免使用干燥保存的膜,干的膜上的抗体很难被去除干净。
5、PVDF 膜上使用的效果好于硝酸纤维素膜。
6、使用非化学发光试剂进行的Western检测,例如DAB,NBT/BCIP,不适用于本试剂。