超高效液相色譜儀作為現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室的核心分析設(shè)備，其規(guī)范操作直接影響檢測(cè)數(shù)據(jù)的可靠性。本文將從儀器準(zhǔn)備、參數(shù)設(shè)置到日常維護(hù)全流程解析操作規(guī)范，為實(shí)驗(yàn)人員提供標(biāo)準(zhǔn)化操作指南。
一、開(kāi)機(jī)前準(zhǔn)備與系統(tǒng)檢查
1.環(huán)境要求確認(rèn)：實(shí)驗(yàn)室溫度需穩(wěn)定在20-25℃，濕度控制在40%-60%，避免陽(yáng)光直射與震動(dòng)干擾
2.氣源壓力檢查：設(shè)定流動(dòng)相脫氣機(jī)壓力為0.3-0.4MPa，確認(rèn)氦氣純度
3.溶劑系統(tǒng)準(zhǔn)備：使用HPLC級(jí)溶劑，按照標(biāo)準(zhǔn)比例配置流動(dòng)相（如A：水含0.1%甲酸，B：乙腈含0.1%甲酸），使用0.45μm濾膜過(guò)濾后超聲脫氣15分鐘
二、系統(tǒng)初始化與平衡
1.管路沖洗程序：依次用甲醇/水(60:40)沖洗泵、進(jìn)樣閥、色譜柱60分鐘
2.壓力測(cè)試確認(rèn)：設(shè)置流速0.5 mL/min，觀察基線(xiàn)穩(wěn)定性，確保壓力波動(dòng)＜±2%（如Waters ACQUITY H-Class）
3.波長(zhǎng)校準(zhǔn)：以氘燈/鎢燈為光源，校準(zhǔn)檢測(cè)器在254nm處的吸收值（誤差＜±1nm）
三、進(jìn)樣操作規(guī)范
1.樣品預(yù)處理：固體樣品需制成0.2-1.0 mg/mL濃度，經(jīng)過(guò)0.22μm濾膜過(guò)濾；生物樣品需酶解處理
2.進(jìn)樣器維護(hù)：每批次分析后用流動(dòng)相清洗進(jìn)樣針5次，每周用65%硝酸浸泡30分鐘
3.進(jìn)樣量控制：梯度洗脫時(shí)進(jìn)樣體積＜10μL（如Agilent 1290 Infinity II），等度洗脫可適當(dāng)增加至20μL
四、檢測(cè)參數(shù)優(yōu)化
1.梯度洗脫程序：水相與有機(jī)相比例需線(xiàn)性變化，如0-5min(20:80)至20min(80:20)，切換時(shí)間差＜0.1min
2.流速控制：根據(jù)色譜柱規(guī)格調(diào)整（4.6×250mm柱適用1.0 mL/min，2.1×100mm柱適用0.3 mL/min）
3.檢測(cè)波長(zhǎng)選擇：優(yōu)先采用化合物最大吸收波長(zhǎng)，必要時(shí)采用多波長(zhǎng)檢測(cè)（如UV 254nm/280nm雙波長(zhǎng)）
五、數(shù)據(jù)處理與結(jié)果驗(yàn)證
1.積分參數(shù)設(shè)置：峰寬閾值≥5s，斜率靈敏度10-20μV/s，拖尾因子≤1.5
2.定量方法驗(yàn)證：R2值＞0.999，回收率95-105%，RSD＜2%（n=5）
3.原始數(shù)據(jù)存儲(chǔ)：按照GLP要求保存原始色譜圖，保留時(shí)間差＜0.2min（重復(fù)性實(shí)驗(yàn)）
六、系統(tǒng)維護(hù)與安全規(guī)范
1.日常維護(hù)要點(diǎn)：
?、倜咳諜z查密封圈狀態(tài)，每周更換自動(dòng)進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子密封
?、诿吭鲁暻逑疵摎鈾C(jī)管路，每季度校驗(yàn)流速準(zhǔn)確性
2.關(guān)機(jī)程序：
①用純甲醇-水(50:50)以1mL/min沖洗系統(tǒng)30分鐘
?、诒３种鶞叵錅囟仍?0-15℃待機(jī)
3.安全注意事項(xiàng)：
?、俳钩瑝翰僮鳎▔毫ΡＷo(hù)閾值設(shè)為30-35MPa）
?、趶U液集中收集處理，避免有機(jī)溶劑泄漏
結(jié)語(yǔ)
通過(guò)嚴(yán)格執(zhí)行上述操作規(guī)范，可使超高效液相色譜儀保持最佳運(yùn)行狀態(tài)。規(guī)范操作不僅保障數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性，更能延長(zhǎng)系統(tǒng)使用壽命（正常達(dá)10年以上），為精準(zhǔn)分析提供可靠技術(shù)支撐。
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