賽默飛液相色譜儀作為高效液相色譜（HPLC）技術(shù)的核心設(shè)備，其操作規(guī)范性直接影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和儀器使用壽命。以下從實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、儀器操作、數(shù)據(jù)處理及維護(hù)保養(yǎng)四個(gè)維度，系統(tǒng)闡述賽默飛液相色譜儀的標(biāo)準(zhǔn)操作流程。
一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備階段
1.流動(dòng)相配制：選用色譜純（LC）級(jí)溶劑，使用0.45μm微孔濾膜過濾后，超聲脫氣10-20分鐘。例如，含緩沖鹽的流動(dòng)相需脫氣5分鐘，防止氣泡影響泵送精度。
2.色譜柱預(yù)處理：根據(jù)分析目標(biāo)選擇填料類型（如C18、硅膠柱），用流動(dòng)相以1.0mL/min流速平衡30-60分鐘，期間需監(jiān)測(cè)基線穩(wěn)定性。
3.樣品預(yù)處理：所有樣品需過濾去除顆粒物，酸性樣品可加入1%醋酸改善峰形，堿性樣品則添加10-20mmol/L三乙胺。
二、儀器操作流程
1.開機(jī)自檢：依次啟動(dòng)泵、進(jìn)樣器、柱溫箱和檢測(cè)器電源，等待1-2分鐘至變色龍服務(wù)管理器激活。
2.管路排氣：擰松泵單元快速清洗閥，設(shè)置A通道流速3.0mL/min沖洗2分鐘，重復(fù)操作B、C通道，確保流動(dòng)相連續(xù)無氣泡。
3.方法設(shè)置：通過“創(chuàng)建”菜單設(shè)定儀器方法，設(shè)置流動(dòng)相比例（如A:C=40:60）、流速（1.0mL/min）及檢測(cè)波長(zhǎng)（如230nm），保存至Chromeleon 7軟件固定文件夾。
4.樣品分析：將標(biāo)準(zhǔn)品和樣品置于自動(dòng)進(jìn)樣器固定位置，啟動(dòng)序列分析，記錄保留時(shí)間和峰面積數(shù)據(jù)。
三、數(shù)據(jù)處理與關(guān)機(jī)
1.數(shù)據(jù)采集：利用軟件自動(dòng)積分功能處理色譜圖，若出現(xiàn)拖尾峰或前沿峰，需調(diào)整流動(dòng)相比例或更換色譜柱。
2.關(guān)機(jī)維護(hù)：分析結(jié)束后，先用甲醇:水=5:95沖洗色譜柱30分鐘，再用100%甲醇沖洗30分鐘。關(guān)閉軟件后，從下至上依次關(guān)閉各單元電源，填寫使用記錄。
四、維護(hù)保養(yǎng)要點(diǎn)
1.日常維護(hù)：每日用稀硝酸溶液超聲清洗過濾器，避免鹽類結(jié)晶堵塞管路。
2.色譜柱保護(hù)：使用保護(hù)柱延長(zhǎng)壽命，當(dāng)柱壓升高時(shí)，用異丙醇-二氯甲烷（1:1）沖洗反相柱，或用純甲醇沖洗正相柱。
3.pH值控制：硅膠基質(zhì)色譜柱的流動(dòng)相pH值需保持在2.5-7.0之間，防止骨架溶解或鍵合相剝離。
通過嚴(yán)格執(zhí)行上述規(guī)程，可確保賽默飛液相色譜儀在藥物分析、環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域持續(xù)輸出穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù)，為科研工作提供堅(jiān)實(shí)保障。
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