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马科研PCR检测试剂盒

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更新时间:2023-04-07 10:29:35浏览次数:303

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产品简介

供货周期 现货 规格 50T
应用领域 环保,生物产业 主要用途 仅供科研实验
英文名称 Equine Coronavirus(ECoV)RTPCR 规格 50T
分类 PCR检测试剂盒 保存条件 -20℃避光保存
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详细介绍

产品属性:
产品名称:马科研PCR检测试剂盒
英文名称:Equine Coronavirus(ECoV)RTPCR

规格:50T

分类:PCR检测试剂盒

储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。

公司产品仅用于科研运输:低温、避光,快递免费送货上门。

实验外包:

1.基因组学:基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析

2.转录组学:microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq

3.蛋白质组学:2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM

4.基因检测:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR

5.蛋白质检测:Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、荧光、ELISA

6.病理检测:HE染色、特殊染色、组织切片、组化、流式细胞分选

7.代谢组学:GC-MS、LC-MS、NMR

8.细胞及动物模型:原代细胞、细胞模型、动物模型构建
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PCR实验方法步骤:

方法

1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix (2mM)

4 μl     引物1(10pM)

2 μl     引物2(10pM)

2 μl     Taq酶 (2U/μl)

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)

1 μl      加ddH2O至 50 μl

PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。

2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。

3:PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。

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使用方法:
一、稀释标准曲线样品(以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。
1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液,*用带芯枪头,下同)。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照(浓度为 1×10E8 拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于PCR 阳性对照。


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