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实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；

2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

产品名称：L15基础培养基细胞

英文名称：L15

货号：BJ-01X1999

产品规格：500ml

 

我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，公司产品仅用于科研由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，*进口来源，*保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。 细胞到达客户手中，1个月内出现任何问题，导致细胞在冻存前死亡，我们公司都可以免费再向客户提供一次。

培养操作步骤 ：

1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

猪胰岛素降解(IDE)联免疫吸附测定试剂盒聚乙烯吡咯烷橡胶PTFE垫片,配套120ZSS棕色瓶,φ20mm*1.4mm赫斯特荧光燃料，33342 98%

猪肝脂 (LIPC)联免疫吸附测定试剂盒聚乙烯吡咯烷中空纯四氟塞,配套120ZSS玻璃瓶,φ18*18胞内钙荧光探针BAPTA, AM  95%

猪补体片段3b(C3b)联免疫吸附测定试剂盒 聚乙烯吡咯烷橡胶覆PTFE垫片,匹配30Zss黑色低盖,φ18*1.52',7'-二-(2-羧乙)-5(6)-羧荧光素 90%

猪血红蛋白β(HBβ)联免疫吸附测定试剂盒 1，3-二羟橡胶覆PTFE垫片,匹配500MLZPA棕色瓶低盖,φ25.5*1.52',7'-二-(2-羧乙)-5(6)-羧荧光素乙酰酯1 mg/ml,溶剂:DMSO

猪α2纤溶抑制因子(α2-PI)联免疫吸附测定试剂盒 1，3-二羟500ZPA四氟柱塞,匹配500MLZPA棕色瓶,Ф23*27.7 ,2',7'-二-(2-羧乙)-5(6)-羧荧光素乙酰酯Mixed isomers

猪促血管生成素1(ANG1)联免疫吸附测定试剂盒1，3-二羟30ZSS中空四氟塞,φ16*17.36-羧荧光素 95%

猪剪切修复交叉互补因1(ERCC1)联免疫吸附测定试剂盒 1，3-二羟PTFE垫片,匹配2ml棕色螺纹玻璃瓶和瓶盖,φ9*1.55-羧荧光素 95%

猪封闭蛋白3(CLDN3)联免疫吸附测定试剂盒 4-氨安替比林PTFE垫片,匹配3ml棕色螺纹玻璃瓶和瓶盖,φ11.8*1.55-羧四罗丹明 95%

猪粒集落激因子受体(GCSFR)联免疫吸附测定试剂盒4-氨安替比林白凡士林 医用级5-羧荧光素琥珀酰亚酯 90%

猪蛋白酪氨磷受体J(PTPRJ)联免疫吸附测定试剂盒4-氨安替比林黄凡士林 医用级5(6)-羧荧光素 95%

猪促状腺激素胚胎因子(TEF)联免疫吸附测定试剂盒3-氨苯乙氢加兰他敏 98%5(6)-羧荧光素琥珀酰亚酯 96%

猪活化凝血因子Ⅻ(FⅫa)联免疫吸附测定试剂盒 3-氨苯乙2,2,6-三-4H-1,3-二噁英-4- 90%6-羧荧光素琥珀酰亚酯 90%

猪糖皮质激素受体α(GRα)联免疫吸附测定试剂盒 3-氨苯乙Amberlite? IR-120阳离子交换树脂 钠型6-羧四罗丹明 for fluorescence, ≥90%

猪磷脂爬行1(PLSCR1)联免疫吸附测定试剂盒4-氨苯乙Amberlyst® 15离子交换树脂 湿6-羧四罗丹明琥珀酰亚酯 for fluorescence

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