详细介绍
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
产品属于:
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 发货周期 |
JC-10 Apoptosis Detection Kit | 10T|20T|50T|100T | 1~3天 |
商品介绍:
本试剂盒可应用于细胞、组织或纯化的线粒体膜电位检测。大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关,其中线粒体跨膜电位(△?)的破坏,被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一,它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体跨膜电位崩溃,则细胞凋亡不可逆转。 本试剂盒采用JC-10 (Enhanced JC-1)一种阳离子脂质荧光染料作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-100 可以选择性地进入线粒体,且由于膜电位的增加,其颜色会发生从绿色到橙色的可逆性改变。这种特性是由于JC-100 聚合物的可逆结构,在膜极化条件下,它的发射光由520nm(JC-100 单体发射光)转移到570nm (J-聚合体发射光)。当在490nm 处激发时,JC-100 发生从绿色到橙绿色的可逆改变。这两种颜色都可以被流式细胞仪上装好的一般滤光器检测到,因此绿色发射光可以通过荧光通道1(FL1)进行分析,橙绿色发射光可以通过荧光通道2(FL2)进行分析。它除了有潜力用于流式细胞术,也可以用于荧光成像分析。 |
注意事项
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. JC-10 避光保存及使用。
3. 细胞培养至汇合度80-90%,收集细胞量在1×106/Test。
4. 对PH 变化过于敏感的细胞建议用胎牛血清取代Buffer 孵育染色及洗涤,或延长观测时间。
5. 流式细胞仪检测线粒体膜电位变化受到多种因素的影响,因诱导剂、细胞株类型,作用时间的不同而荧光强度比例都有不同,因此没有通用标准的补偿设门指南,因此每个试验需设阴性及阳性对照组进行荧光补偿及设门。
6. 组织需先制备单细胞悬液或提取纯化线粒体后方可进行检测,可选用我司细胞悬液制备试剂盒或线粒体提取试剂盒。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
α2抗纤溶酶(α2-AP)elisa试剂盒英文名称:α2-AP ELISA Kitβ-乳球蛋白抗体包装5g
α1微球蛋白(α1-MG)elisa试剂盒英文名称:α1-MG ELISA Kit缓激肽B2受体抗体包装1g
α1性糖蛋白(α1-AGP)elisa试剂盒英文名称:α1-AGP ELISA Kit丁酰碱酯酶抗体(N端)包装25g
α1抗胰白酶(AACT)elisa试剂盒英文名称:AACT ELISA Kit丁酰碱酯酶抗体(C端)包装5g
α1干扰素(IFN-α1)elisa试剂盒英文名称:IFN-α1 ELISA KitBLAME抗体包装10MG
Wnt-3a蛋白(WNT3A)elisa试剂盒英文名称:WNT3A ELISA Kit巴曲霉素单克隆抗体包装25g
Wnt-10b蛋白(WNT10B)elisa试剂盒英文名称:WNT10B ELISA Kit蛇巴曲酶抗体包装5g
V-Ha-Ras肉瘤病毒癌基因同源物(HRAS)elisa试剂盒英文名称:HRAS ELISA Kit溴脱氧尿苷抗体包装1g
T细胞活化连接蛋白(LAT)elisa试剂盒英文名称:LAT ELISA Kit肿瘤/抗原2.2抗体包装25g
T细胞表面糖蛋白CD3 epsilon链(CD3E/T3E)elisa试剂盒英文名称:CD3E/T3E ELISA Kit肿瘤/抗原2.3抗体包装5g
T细胞白血病同源盒蛋白1(Tlx1/Hox11/Tlx-1)elisa试剂盒英文名称:Tlx1/Hox11/Tlx-1 ELISA Kit肿瘤/抗原2.4抗体包装1g
Toll样受体9(TLR-9/CD289)elisa试剂盒英文名称:TLR-9/CD289 ELISA Kit脑钠素/利钠肽抗体包装5g
Toll样受体7(TLR7)elisa试剂盒英文名称:TLR7 ELISA KitB Raf抗体包装1g
Toll样受体5(TLR-5)elisa试剂盒英文名称:TLR-5 ELISA Kit癌易感基因1抗体包装5g
TGF-β诱导早期基因1(TIEG1)elisa试剂盒英文名称:TIEG1 ELISA Kit癌易感基因2抗体包装25g
磷化腺苷单磷活化蛋白激酶α1抗体基质衍生因子2样蛋白1(SDF2L1)MHY1485 是一种有效的渗透性 mTOR 激活剂,靶向 mTOR 的 ATP 结构域。MHY 1485 通过抑制自噬体和溶酶体之间的
细胞凋亡线粒体膜电位检测试剂盒(JC-10)硬脂锌
其他 硬酯锌;十八锌;脂蜡锌;十八锌盐;硬脂锌盐
英文名称: Stearic acid zinc salt
其他英文名称: Zinc stearate;Octadecanoic acid zinc salt
产品规格: CP,13.5-15.5%
包装:500克
CAS号:557-05-1
C36H70O4Zn=632.33
级别:CP
含量(以ZnO计):13.5~15.5%
度(以H+计):≤1.74mmol/100g
水溶物:≤0.5%
干燥失重:≤1.0%
氯化物:≤0.2%
硫盐:≤0.2%
性状:细软粉末。微有刺激性气味。有滑腻感。中性反应。 能被稀所分解。溶于、热乙和松节油等有机溶剂,不溶于水、乙。相对密度 1.095。熔点 约120℃。小致死量(大鼠,腹腔)250mg/kg。商品常为硬脂锌、棕榈锌和适量氧化锌的混合物。
用途:生化研究??古菽?。光和热稳定剂。油漆平光剂和研磨剂。橡胶干燥润滑剂和隔离剂。塑料脱模剂?;炷?、褐块石棉、纸、织物的防水剂
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