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1、配制过滤除菌的细胞培养基

(1) 阅读培养基使用说明，确定需要添加何种添加剂（如NaHCO3、L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等）。

(2) 根据所需将培养基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）将袋内残留培养基洗下，并入容器。加注射用水至总体积的95％，轻微搅拌溶解。

(3) 加入规定量的碳酸氢钠及所要添加的物质。

(4) 轻微搅拌溶解，加注射用水至规定体积。

(5) 用1 mol / L 氢氧化钠溶液或 1 mol / L 盐酸溶液调pH至所需值。

(6) 用0.22 μm滤膜正压过滤除菌。

(7) 溶液应在2℃－8℃下避光保存。

具体使用方法参照培养基包装袋上的说明书。

2、配制可高压灭菌细胞培养基

(1) 根据所需将培养基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）将袋内残留培养基洗下，并入容器。加注射用水至总体积的95％，轻微搅拌溶解

(2) 在121℃、15psi下灭菌15分钟。

(3) 待溶液冷却至室温，加入无菌0.2 mol / L L－谷氨酰胺溶液规定体积、无菌7.5％（w/v）碳酸氢钠溶液规定体积，加注射用水（20℃～30℃）至规定体积，混匀。

(4) 如果必要，用1 mol / L 氢氧化钠溶液或 1 mol / L 盐酸溶液调pH至所需值。

(5) 溶液应在2℃－8℃下避光保存。

具体使用方法参照培养基包装袋上的说明书

注意事项：

1） 细胞培养用水一般为三蒸水（经石英蒸馏器蒸馏）或超纯水，医药生产上一般为注射用水。

2） 建议尽量选择与所用量相匹配的包装一次使用，因为包装一旦打开，组分可能会变质或因受潮而结团。

3） 溶解干粉培养基时先加入终体积90％－95％的培养用水，添加剂加完后再补足。

4） 如需添加的组分较多时，某一组分全溶解后，再添加另一组分。

5） 待培养基全溶解后再加入碳酸氢钠，以免产生沉淀。

6） 所有成分全溶解后，培养基应立即过滤或高压除菌，以免产生沉淀或有微生物污染。

7） 在过滤除菌时，一般情况下应调pH比所需值低0.1～0.2个单位，因过滤除菌后，pH值会升高约0.2。

8） 在细胞培养过程中，建议不加或加少量的抗生素，如血清的浓度较低则所加抗生素的量也要相应降低一些。

9） 建议用1 N HCl或1 N NaOH来调节培养基的pH，因为用碳酸氢钠来调对培养液的渗透压影响比较大。