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    酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，ELISA）是免疫学和分子生物学中广泛使用的实验室技术，能够应用 ELISA 实验的样本种类很多，有血清，血浆，细胞上清，细胞裂解液，尿液，关节滑液，脑脊液，肺泡灌洗液，各种组织的组织匀浆；采集和处理的方式都不相同。

一、血清 

1、将全血收集到未经处理的测试管中，或者到不含抗凝剂的管中，如 BD 血清用真空采血管。

2、在室温下连续孵育 20 分钟。 

3、4℃ 3,000 rpm 离心 10 分钟。

4、立即分装上清液（血浆）并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。

二、血浆

1、将全血收集到含抗凝剂的管中，例如 BD 抗凝真空采血管（目录号：363080/363080）或添加 0.1M 柠檬酸钠至 1/10 终体积。

2、4℃ 3,000 rpm 离心 10 分钟。

3、立即分装上清液（血浆）并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。

 

三、细胞培养物上清液

1、将培养基移至离心管， 4℃， 1,500 rpm 离心 10 分钟。

2、立即进行上清液的分装（血清）并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数

 

四、细胞提取物

1、将组织培养板放置在冰上。

2、吸出培养基并用预冷PBS 轻轻洗涤细胞一次。

3、吸出 PBS ，加入100 mm 培养板加入0.5ml*提取缓冲液。

4、收集细胞至在倾斜板中，然后移至经过预冷的离心管中。

5、短暂涡旋后在冰上孵育 15-30 分钟。

6、在 4℃ 下13,000 x rpm 离心 10 分钟，沉淀不溶性内容物。

7、将上清液（这里是指可溶性细胞提取物）分装至预冷的离心管中，并于 -80℃ 保存。尽可能减少反复冻融次数。

 

五、条件培养基

1、将细胞接种到*（含血清）生长培养基中，使细胞增殖达到一定的融合率。

2、弃去培养基，数毫升预热PBS 小心洗涤。重复洗涤步骤。

3、弃去PBS 洗涤液并小心加入无血清培养基。

4、孵育 1-2 天。

5、将培养基移至离心管， 4℃ 1,500 rpm 离心 10 分钟。

6、立即分装上清液（血清）并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。

 

六、乳汁

1、收集样品并在 4℃ 下以 10,000 x g 离心 2 分钟。

2、分装上清液并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。

 

七、尿液

1、收集样品并在 4℃ 下以 10,000 x g 离心 2 分钟。

2、等分上清液（血清）并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少冻融循环次数

 

八、唾液 

1、收集样品并在 4℃ 下以 10,000 x g 离心 2 分钟。

2、立即分装上清液（血浆）并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。

 

九、组织提取物 

1、用干净的工具解剖组织，最好在冰上、尽快进行，以防止被蛋白酶降解。

2、将组织置于圆底的微量离心管中，并浸入液氮中进行“速冻"。将样品保存在 -80℃ 下以便后续使用或放置在冰上进行直接匀浆。 

3、对于约 5 mg 的组织片，可向管中添加约 300 µl *提取缓冲液（查看细胞/组织提取缓冲液配方），然后用电动匀浆器匀浆。 

4、清洗刀片两次，每次清洗使用 300µl *提取缓冲液，然后在 4℃ 下维持恒定搅拌 2 小时（例如置于冷室中的回旋振荡器上）。 

5、 4℃ 13,000 x rpm 离心 20 分钟。置于冰上，将上清液（这里是指可溶的蛋白质提取物）分装至新、预冷的管中并在 -80℃ 下保存样品。尽可能减少反复冻融次数。